《实验二通》PPT课件

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1、一、抗酸染色(2.5学时)每人一张玻片。二、肠道致病菌的分离培养(1.5学时)SS培养基：8个粪便标本：8管粪便标本：大肠杆菌和乙型副伤寒沙门菌第二次实验课内容（3个）三、细菌的分布与消毒(1学时)手指消毒：酒精、碘酒、新洁尔灭1.空气中细菌的检查普通平板：1个2.咽喉部细菌的检查血平板：2个3.手指消毒前后的细菌学检查普通平板：4个内容提要三.细菌的分布与消毒一.抗酸染色二.肠道致病菌的分离培养一、实验目的1.掌握抗酸染色的操作方法。2.熟悉抗酸染色的原理。抗酸染色分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，

2、它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要通过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝菌酸与染料结合后，很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再用碱性美蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其它细菌及背景中的物质为蓝色。二、实验原理细菌：卡介苗染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美蓝溶液其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等三、实验材料1、细菌涂片的制备涂片干燥固定2、染色1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复

3、红2-3滴，在火焰高处（2～10cm）徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热3～5min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：3%盐酸酒精脱色30s～1min；用水冲洗。3）复染：用碱性美蓝溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。四、方法与步骤（与革兰染色的区别）五、实验结果未染色初染后脱色后复染后初染脱色复染石炭酸复红盐酸酒精碱性美蓝结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈蓝色。六、注意事项1、无菌操作2、染色时间要充分3、初染时加热勿沸腾

4、勿干涸二、肠道致病菌的分离培养（88页）一.肠道杆菌的生物学性状二.S-S培养基的特性及用途三.分离培养方法主要内容一.肠道杆菌的生物学性状埃希菌属：大肠埃希菌沙门菌属：伤寒沙门菌甲型、乙型副伤寒沙门菌志贺菌属：痢疾志贺菌肠杆菌科重要菌属及代表菌种1、相似的形态染色—从形态上无法区别中等大小的G-杆菌多有鞭毛、菌毛乳糖发酵试验初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌肠道非致病菌多数不发酵乳糖多数发酵乳糖2、活泼的生化反应-/+-+伤寒杆菌--+痢疾杆菌-⊕⊕大肠杆菌硫化氢乳糖葡萄糖菌名三种细菌的生化反应胆盐抑制G+

5、,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。常用于肠道致病菌的分离培养。二、S-S培养基的特性及用途细菌SS平板大肠杆菌粉红色大菌落痢疾杆菌无色细小半透明菌落伤寒杆菌无色细小半透明菌落S-S培养基中菌落特点：大肠杆菌痢疾杆菌将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培养基。(每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好)放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰箱中保存备用。三、分离培养方法三、细菌的分布与消毒1.细菌在自然界的分布2.化学因素对细

6、菌的影响1.空气中细菌的检查：（42页，每个班1个普通琼脂培养基）原理：空气中携带有微生物的气溶胶粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。方法：在室内选择一处放一个平皿。打开皿盖，使培养基面向上暴露在空气中15min，即盖上皿盖，37℃倒置培养24小时，观察结果。每个班2个血液琼脂培养基取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次；盖上平皿盖，置37℃温箱中倒置培养24h后取出观察结果。2.咽喉部细菌的检查方法：取一普通琼脂培养基，一部分写上“前”，另一部分写上

7、“后”，然后将手指在写有“前”的部分按一下，再将手指用酒精进行消毒，待干后，在写有“后”的部分按一下。放入37℃温箱培养24小时后观察。（46页，每个班4个平皿）3.手指皮肤消毒前后的细菌学检查实验报告内容：抗酸染色一、原理二、材料三、方法四、结果（图加描述）五、注意事项预习1.请将实验后的玻片放入前面的消毒缸中。2.离开实验室之前请用肥皂洗手。物理因素对细菌的影响肠道致病菌的鉴定药敏实验