《初始污染菌检查》PPT课件

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1、生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测指标含义（！）通过测定检品细菌总数可用来判明检品细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综合依据。初始污染菌检测目的：保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。引用标准：GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法GB15980-1995规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对

2、一次性使用医疗用品（包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品）生产企业中生产、装配、包装车间（空气中细菌总数检查方法）等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品（10个包装）方法主要步骤采样供试液制备培养菌落计数初始污染菌检测采样方法供试液制备供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。2.供试品是液体取

3、10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。作为供试液。4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2010年规定进行)5.对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后取样。6.对一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液（1ml/10cm2）冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。初始污染菌检测梯度稀释1

4、ml1ml1ml1ml1ml供试液9mlNacl9mlNacl1:101:1001:1000检验方法将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……）初始污染菌检测结果计算公式：平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次（或g）=———————————————————件次或重量（g）注意事项：供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。产品初始污染菌数限值：灭菌产品管道类内腔≤10cf

5、u/件次，外部≤100cfu/件次，非管道类≤100cfu/件次，敷料类≤100cfu/g；消毒产品≤1000cfu/件次或重量（g）初始污染菌检测供试液制备推荐的制备方法样品制备供试液制备梯度稀释加样用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。作为1：10供试液。供试液10倍递减稀释。尽量避免丝线等杂物的混入。（1）每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注5个平皿。（2）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个注入1ml稀

6、释液（灭菌生理盐水）灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。纱布模拟培养琼脂凝固后，倒置，37℃培养48h细菌计数基本概念细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。限制条件平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下：⑴以菌落数为基础。CFU(colonyformingunits):一个菌落就是一个细菌形成单位，它可以由一个也可以由多个菌细胞形成。⑵受特

7、定培养基和培养条件限制。⑶有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。细菌计数先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀释度的5个平板值，相加后除以5）。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。菌落特征⑴形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄

8、色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色）⑵边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。⑶大小差异很大。平皿号细菌数平行行间1：101:100阴性对照37℃48h菌落计数37℃48h菌落计数ⅠⅡⅢⅣⅤ菌落均值1、选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释