生化分析知识点总结

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1、一．氨基酸1八种必须氨基酸的英文命名及缩写。赖氨酸LysineLysK甲硫氨酸MethionineMetM缬氨酸valineValV异亮氨酸isoleucineIleI苯丙氨酸phenylaninePheF亮氨酸leucineLeuL色氨酸tryptophanTryW苏氨酸threoninethrT2俩种氨基酸组成多肽时，有几种？成二肽，有四种成三肽时，有八种（仅供参考，不一定正确，有不同意见请指出来）。二酶分析1酶活性的定义，国际常用的单位：酶活性（enzymeactivity）也称为酶活力，指酶促反应速率，即规定条件下在单位时间内产物的生成量或底物的减少量。酶活性单

2、位：表示酶的相对含量，指在一定条件下，单位时间内生成一定量的产物或消耗一定量的底物所催化的酶量。a．国际单位IU（µmol/min）定义：在规定条件下（25℃及其他最适条件），每分钟催化1µmol底物转变为产物的酶量，为1IU或1U。1IU=1µmol/min。19B．Katal单位（mol/s）定义：1Katal是在规定条件下，每秒钟催化1mol底物转变为产物的酶量。1Katal＝1mol/s。IU与Katal单位的关系：1katal=60×106IU，1IU=16.67nkatal3酶促反应酶促反应的历程：延滞期，线性期，非线性期a．酶促反应式：B．米氏方程19C．

3、Km的含义与意义．Km的含义:当Km=[S]时，可见Km值等于反应速率达到最大反应速率Vmax一半时的底物浓度。Km的意义：Km是酶的一个特征性常数（其他如等电点），Km的大小只与酶的性质有关反映酶对底物亲和力的大小选择酶的最适底物或天然底物计算不同底物浓度时的反应程度鉴别酶的种类判断可逆反应的速率判断酶偶联反应的限速反应计算工具酶的用量3.两种测定酶活性的方法：a．定时法原理：定时法是固定时间法的简称，是指测定反应开始后一段时间（t1～t2）产物的增加量或底物的减少量以测定酶活性的方法。该方法一般需要在反应进行到一定时间后用强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止反应。优点：简单

4、、不需要保温设备、不用考虑酶的活性。缺点：如果不做预试验则无法了解其酶促反应进程（t1-t219）是否为零级反应，故难以确保测定结果的准确性。b．连续检测法：原理：连续监测法是指在多个时间点连续测定产物（或底物）在线性期内的生成量（或消耗量）即零级反应速率以测定酶活性的方法，又称速率法、零级反应速率法、斜率法。该方法是在一定的反应时间区段内（至少9～120s）每隔一定时间（常为2～30s）读取一次吸光度值，连续测定多点（至少4点），然后对吸光度数据作最小二乘法处理，再用线性期内的数据计算单位时间内的反应速率△A/min，最后计算出酶活性。连续监测法的特点：属于即时观测，

5、无需停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂，可将多点的测定结果绘图连线，快速、直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直线的线性期；连续监测法要求不显色而是直接测定底物（或辅助底物即中间底物）或产物量的变化，因此，可以选择紫外吸收法或生色原显色法；能够准确地控制温度、pH值和底物浓度等，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及全自动生化分析仪都能满足这些要求；测定结果常较定时法高。194.固定化酶和游离酶的优点和缺点：a．固定化酶优点：增加了酶的活性和稳定性可回收重复使用，降低了酶耗酶反应过程便于控制适用于连续反应易于反应体系分离对环境的耐受性增强缺点：对酶的物理化学性质产生

6、一定的影响。b．游离酶优点：易溶于水于底物的作用面积大，反应充分活性接近生理状态缺点：难与底物分离反应条件控制严格不能反复利用，易失活三．蛋白质分析1.蛋白质的盐析，变性及二者的区别盐析：在蛋白质溶液中加入某些无机盐的浓溶液，使蛋白质的溶解度下降而从溶液中析出来的现象。变性：在热、重金属、酸、碱、某些有机物等作用下，蛋白质的物理性质和生理功能发生改变的现象，称为蛋白质的变性。19蛋白质盐析和变性的区别与对比2.蛋白质的序列分析：测得的是蛋白质的一级结构。蛋白质的结构：一级结构：蛋白质的氨基酸残基的序列，一级结构的作用力：肽键，S-S键。二级结构：α-螺旋，β-折叠，β-

7、转角，无规卷曲二级结构形成的力量：氢键超二级结构：若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体19是球状蛋白质的折叠单位，在空间上彼此分隔，各自具有部分生物功能的结构含100~200个氨基酸残基，1条长的多肽链首先折叠成几个相对独立的结构域再缔合成三级结构。三级结构：由若干二级结构单位，完全折叠后可组成一个完整的蛋白质分子，即为三级结构，可具有活性。三级结构形成的力量：氢键，离子键，疏水键，双硫键3.蛋白质分子量的测定方法：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）和凝胶过滤层析