人教版教学课件基因工程基本操作程序

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1、1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤一、目的基因的获取(一)目的基因主要是______________________,也可是一些具有调控作用的因子。目的基因的获取方法主要有____________和___________两大类编码蛋白质的基因（二）获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成法（反转录法和化学合成法）如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基

2、因、与工业用酶相关的基因等。直接分离法人工合成法1、从基因文库中获取目的基因（1）基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库1、原核细胞基因结构：基因非编码区：非编码区：调控序列编码区：编码蛋白质终止子：终止转录启动子：启动转录，RNA聚合酶结合识别位点mRNA翻译特定功能的蛋白质转录特点：编码区是连续的，非编码区起调控作用DNA分子2：真核细胞基因结构：基因非编码区：非编码区：编码区

3、：编码蛋白质终止子启动子前体mRNA外显子和内含子都转录特点：编码区间隔不连续！分为内含子和外显子。编码蛋白质不编码蛋白质剪切掉内含子转录的部分mRNADNA分子提取某种生物的全部DNA适当的限制酶一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组DNA分子基因组文库导入受体菌（2）基因文库的构建方法①基因组文库的构建有启动子和内含子提取某生物特定发育时期的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载体与载体连接cDNA文库逆转录酶DNA聚合酶导入受体菌②cDNA文库的构建-----逆转录法：部分基因：基因的选择性表达无启动子和内含子真核生物的基因用逆转录法得到的c

4、DNA与原基因相同吗？有哪些差异？原核生物基因呢？思考？真核生物：无非编码区和内含子原核生物：无非编码区（3）构建基因文库的目的怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?便于在不知道目的基因核苷酸序列的情况下，获得所需的目的基因。依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性（4）从基因文库中得到目的基因的方法2、利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术。②原理：__________

5、多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制③前提__________一段已知目的基因的核苷酸序列④过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍一：以_____方式扩增，指数⑤方式：⑥条件：模板DNA（含目的基因）四种脱氧核苷酸1对引物热稳定的DNA

6、聚合酶(Taq酶)一段已知目的基因的核苷酸序列过程：PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化学合成推测推测3、人工合成法基因较小，核苷酸序列已知（化学合成法）化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？需要模板吗？反转录法mRNARNA－DNA杂合双链单链DNA双链DNA逆转录酶DNA聚合酶（1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。（2）用___________切断目的基因，使其产生_________________。（3）将切下的目的基

7、因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相同1.过程:第二步：基因表达载体的构建3、基因表达载体的组成？①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代②使目的基因能够表达和发挥作用2、基因表达载体构建的目的？（P162）目的基因必须在启动子与终止子之间目的基因启动子：基因的首端，RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA终止子：基因的尾端，终止转录标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基

8、因就可以完成任务吗？为什么？不可以。因为目的基因在表