病毒的发现特点和定义

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1、第七章病毒第一节　概述病毒的发现病毒的特点和定义病毒的发现18代埃及王朝时代（1500年BC），浮雕刻有一条萎缩腿的祭司——脊髓灰质炎。古希腊哲学家亚里斯多德早在公元前四世纪描述狂犬病症状。公元前2~3世纪，我国和印度都记载过天花。17世纪西欧的郁金香热——花叶病毒使花瓣呈美丽的杂色。病毒的发现此后，许多学者陆续发现了各种植物病毒、动物病毒和细菌病毒（噬菌体）。病毒的发现人类初步认识病毒的存在，是在19世纪末期。1886年，德国的A.Mayer在荷兰发现烟草上出现深浅相间的绿色区域——烟草花叶病毒。随后证实其具有传染性。1898年，荷兰学者M.W.Beijerinck独立进行了烟草花叶

2、病病原体的研究，首次提出其病原是一种“传染性的活性液体”或称“病毒”，从此病毒学的历史被揭开。病毒的发现1935年美国的Stanley首次提纯并结晶了烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus)TMV，认识有了大突破。接着，Bawden等进一步揭示了TMV的化学本质并不是纯蛋白，而是核蛋白。1940年德国的Kausche等首次在电镜下观察到TMV的杆状外形。一、病毒的特点和定义病毒的特点病毒的定义病毒的特点形体极其微小，电镜下才能观察。没有细胞构造。其主要成分是核酸和蛋白质。每一种病毒只含有一种核酸(DNA或RNA)。既无产能酶系，也无蛋白质合成系统。在宿主细胞协助下，通过核酸

3、的复制和核酸蛋白质装配的形式进行增殖。在宿主的细胞内营专性寄生。在离体的条件下，能以无生命的化学大分子状态存在，并可形成结晶。对一般抗生素不敏感，但对干扰素敏感。病毒的定义病毒是一种生物实体，其基因组是能利用细胞的合成系统在活细胞内复制，并合成能将病毒基因组转移到其他细胞中去的特殊颗粒的核酸分子（DNA或RNA）。第二节　病毒学研究的基本方法病毒的分离与纯化病毒的测定一、病毒的分离与纯化标本的采集与处理标本接种与感染表现标本的采集与处理足够量的活病毒采集标本的种类确定最适采集时间标本处理的方法：加抗菌素除菌等方法。标本处理后应立即接种，数小时内可置50%中性甘油内4℃保存，较长时间冻存

4、标本最好置-20℃以下或干冰保存。标本接种与感染表现标本接种于何种实验宿主以及选择何种接种途径主要取决于病毒的宿主范围和组织嗜性，同时应考虑操作简单、易于培养、所产生的感染结果容易判定等要求。噬菌斑将噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆形局部透明区域，即为噬菌斑。噬菌斑(plaque)下层培养基双层培养基敏感菌+上层培养基噬菌体稀释液培养噬菌斑噬菌斑敏感菌菌苔噬菌斑(plaque)概念：噬菌斑是指在宿主细菌的菌苔上，噬菌体使菌体裂解而形成的空斑。Localizedareasofcellulardestructionandlysiscausedby

5、virusinfectionarecalledplaques应用：1、噬菌体定量计数2、噬菌体的鉴定空斑和蚀斑在动物细胞培养物上的与噬菌斑类似的空斑，称为蚀斑。因为受肿瘤病毒感染。蚀斑（空斑）若动物病毒标本经过适当稀释进行接种并辅以染色处理，病毒可在培养的细胞单层上形成肉眼可见的局部病损区，即蚀斑（空斑）。枯斑植物病毒接种敏感植物叶片可产生坏死斑，称为枯斑。枯斑包涵体（inclusionbody）在病毒感染寄主细胞时，对被感染细胞进行染色，则可观察到细胞内有明显区别的大小不等的颗粒状结构体，这些结构体总称为包涵体。包涵体包涵体可分为两类。一类是在细胞内增殖的病毒颗粒及集落，如腹股沟淋巴

6、肉芽病毒和天花病毒的包涵体。另一类是由于病毒感染后，在细胞产生的一种反应生成物，例如由狂犬病病毒而引起狗脑神经细胞中的包涵体。包涵体包涵体有的在细胞质中，腹股沟淋巴肉芽瘤、天花、狂犬病等。有的在细胞核内，特称为核包涵体。包涵体是病毒的聚集体;是病毒的合成部位;是病毒蛋白和病毒感染有关的蛋白质病毒纯化病毒纯化的标准病毒纯化的方法病毒纯化的标准病毒纯化有二个标准：由于病毒是有感染性的生物体，所以纯化的病毒制备物应保持其感染性。由于病毒具有化学大分子的属性，病毒毒粒具有均一的理化性质，所以纯化的病毒制备物的毒粒大小、形态、密度、化学组成及抗原性质应具有均一性表现。病毒纯化的方法根据病毒的基本

7、理化性质建立纯化的方法：毒粒的主要化学组成是蛋白质，鉴于病毒的高蛋白含量，故可利用蛋白质提纯方法来纯化病毒，如盐析、等电点沉淀、离子交换等。毒粒是由许多大分子组成，离心时它们比细胞蛋白沉降更快，而且许多病毒都有较高的浮密度，所以超速离心技术广泛地用于病毒纯化。一般可在10000~100000g的离心场中1~2h沉降。病毒纯化的方法病毒的测定病毒的物理颗粒计数（电镜下直接计数）病毒的感染性测定病毒的感染性测定病毒的感染单位：能够引起宿主或宿主细胞