疫浊度测定及其临床应用

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1、免疫浊度测定及其临床应用免疫测定IMMUNOASSAYIA免疫测定原理利用抗原抗体反应检测标本中微量物质抗原+抗体抗原抗体复合物Ag+AbAg*Ab免疫测定特点特异性抗原性不同的物质不干扰敏感性g---ng---pg可测物蛋白质，酶，激素，药物，毒品免疫测定分类免疫浊度测定g~ng标记免疫测定ng~pg免疫浊度测定免疫沉淀反应海德堡曲线Heidelberg’sCurve抗原浓度测定范围抗体过剩抗原过剩Ag*Ab免疫浊度测定分类透射浊度法散射浊度法透射浊度法和散射浊度法的光路检测器A(透射浊度法)检测器

2、B(散射浊度法)I0I浑浊样品光源散射浊度法AnalyteAntibodyOtherstuffAnalyte-antibodycomplexingNowbigenoughtoscatterlightToosmalltodetectopticallyWhathappensinsidetheflowcell?321TimeScatterScatterSignalVersusTimeNephelometry1.Bufferaddition2.SampleAddition3.AntibodyadditionFl

3、uidinthecellhascauseslittlescatterAddingsampleincreasesscatterslightlyAddingantibodycausesalargeincreaseinlightscattering免疫浊度测定分类2终点法速率法终点法固定时间法速率散射浊度法速率峰的测定速率峰的测定321TimeScatterMeasuretheRATEAfterAntibodyAdditionRateNephelometry1.Bufferaddition2.SampleAdd

4、ition3.AntibodyadditionFirstderivative:rateofchangeofscatterovertime;thisistheSLOPEofthecurveRatePEAKRATETIMERATERateofChangeofScatterSignalversusTimeCONCENTRATIONRATE在速率峰基础上完成的标准曲线抗原过剩的测定Analyte-antibodycomplexingAnalyteAntibodyAntigenExcessRATEofSCATTE

5、R抗体过量时的反应抗原过量时的反应60850反应时间(秒)ARRAY抗原过量自动检测加入校正液药物浓度测定免疫浊度抑制测定(小分子物质)12Conjugate-antibodycomplexing213Inhibitionofcomplexingbyhapten(drug)1.Conjugate(haptenoncarrier)2.Antibody3.Hapten(drug)免疫浊度测定试剂抗体试剂的要求1特异性2亲和力3反应时保持抗体过剩测定范围应包括高于及低于正常值的50%5测定的精密度应在5%左

6、右校正曲线：聚乙二醇的增强作用抗原浓度C1C2C3吸光度4%聚乙二醇不加聚乙二醇试剂组成配方举例试剂1100mmolTris或磷酸缓冲液pH7.2~8.24%聚乙二醇(分子量6000或10000)1%非离子型表面活性剂150mmol氯化钠或硫酸钠0.1g/l叠氮钠试剂2100mmolTris或磷酸缓冲液pH7.2~8.220%多克隆羊抗血清150mmol氯化钠0.1g/l叠氮钠抗原浓度测定范围抗体过剩抗原过剩Ag*Ab技术特性并行的检测系统:RateNIPIARateNephelometryNIPIA：近

7、红外颗粒速率法免疫分析BenefitsAbilitytoexpandthemenuintohighsensitivityassaysincluding:Ferritin,Digoxin,andIgE.NIReliminatestheinterferenceofbiologicalsubstancessuchasbiliribinandhemoglobin.NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析优点扩展检测菜单，增加高敏项目分析：如铁蛋白，地高辛，IgE，超敏CRP等近红外波长分析消除生物物质如胆红素和血色素

8、的干扰NIR：940nm波长近0oC检测角检测颗粒大小：200~500nm直径速率法测定NIPIA：940nmLED光源速率散射法：670nm激光光源蛋白应用分类心血管功能监测载脂蛋白A1载脂蛋白B脂蛋白a