9-植物DNA分子标记

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1、植物DNA分子标记分子标记的概念广义的分子标记（molecularmarker）：可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白。包括蛋白质标记和DNA标记（狭义的分子标记）。蛋白质标记包括动植物蛋白、同工酶及等位酶理想的分子标记：1.高多态性2.共显性遗传*3.能明确辨别等位基因4.遍布整个基因组5.无基因多效性**6.检测手段简单快速7.成本低廉8.重复性好*杂合子的一对等位基因各自都具有自己的表型效应，称为共显性（codominance）**基因多效性（genepleiotropism）：一个基因产生多种表型效应的现象。DNA分子标记（DNAmolecularmarker）直接在DNA分子水平

2、上检测生物间的差异，是DNA水平上遗传变异的直接反应。随着分子生物学技术的发展，现在DNA分子标记技术已有数十种，广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。DNA分子标记大多以电泳谱带的形式表现，分为非PCR依赖的分子标记(基于Southern杂交技术的分子标记)和PCR依赖的分子标记。非PCR依赖的分子标记(基于Southern杂交技术的分子标记)包括：限制性片段长度多态性标记（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）原位杂交（insituhybridization）PCR依赖的分子标记：随机扩

3、增多态性DNA标记（randomamplificationpolymorphismDNA,RAPD）DNA扩增指纹印记（DNAamplificationfingerprinting,DAF）简单序列重复标记（simplesequencerepeat,SSR）随机引物聚合酶链式反应（arbitrarilyprimedPCR,AP-PCR）扩增片段长度多态性标记（amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP）基于分子杂交技术的分子标记技术此类标记技术是利用限制性内切酶解及凝胶电泳分离不同的生物DNA分子，然后用经标记的特异DNA探针与之进行杂交，通过放射自

4、显影或非同位素显色技术来揭示DNA的多态性。分子杂交：由具有互补碱基顺序的任何两条单链核酸分子片断形成双链的过程。染色体原位杂交是指DNA探针与染色体上的DNA杂交，并在染色体上直接进行检测的分子技术，其原理是两条核苷酸单链片断在适宜的条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA双键分子，用带有标记的DNA或者RNA片断作为核酸探针，与细胞内染色体杂交，用放射自显影等方法予以显示，在荧光显微镜下观察目的mRNA或者DNA的存在与定位。InsituhybridizationForinsituhybridization,atissuesampleisincubat

5、edwithalabelednucleicacidprobe,excessprobeiswashedawayandthelocationofhybridizedprobeisexamined.Thetechniqueenablesthespatiallocalizationofgeneexpressiontobedeterminedaswellasthelocationofindividualgenesonchromosomes.bcdaFig.5GISHimagesofchromosomesoftetraploidanddiploidFestuloliumprogenies.TheDN

6、AofL.perennewasusedasprobe,andshownasbluecolor.ThechromosomesofF.pratensiswereshownaspalebluecolor.Translocationbreakpointsareindicatedinaandcbyarrows.(a)Bx350-184,a28-chromosomegenomewithatleast14intergenerictranslocations,someofwhichhavetwobreakpointsinanarm(arrows).Bar:10μm.(b)Bx351-160,a28-ch

7、romosomegenomewithintergenerictranslocations.Bar:20μm.(c)Bx350-177withfertilepollen,a28-chromosomegenomecomprisingapproximatelyequalamountofLoliumandFestucaDNAwith9intergenerictranslocations,someofwhichhavetwobreakpoin