结晶紫分光光度法测定肝素

《结晶紫分光光度法测定肝素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第!"卷第#期西南师范大学学报（自然科学版）!$$!年%$月&’()!"*’)#+’,-./(’01’,234562738./*’-9/(:.8;5-682<（*/2,-/(1=85.=5）>=2)!$$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!文章编号：%$$$#?"（%!$$!）$#$"@#$?结晶紫分光光度法测定肝素!徐红，刘绍璞，罗红群西南师范大学环境研究所，重庆?$$"%#摘要：在AB#C$D"C#的E-822’.FG’H8.6’.缓冲溶液中，

2、肝素与碱性三苯甲烷染料结晶紫形成离子缔合物时，染料发生明显的褪色，体系吸光度的降低与肝素钠浓度成正比，肝素浓度在$D!C?"IJ9K范围内符合比耳定律，方法具有高灵敏度，摩尔吸光系数为@C?#L%$MK·9’(N%·=9N%)研究了表面活性剂和共存物质的影响，表明方法选择性好)用于肝素钠注射液效价的测定，结果满意)关键词：分光光度法；肝素；结晶紫中图分类号：!"#$%&文献标识码：’肝素（B5A/-8.，简称为B5A）为葡糖胺聚糖，是蛋白多糖的一种)在人体内由肥大细胞分泌而自然存在于血液中)它具有广泛的生物学功能，如抗凝血、调血脂、抗血栓

3、、免疫调节、抗炎、抗过敏等，是预防血栓形成和治疗急性静脉血栓的重要药物［%］)近年来的研究表明，肝素的药效与剂量密切相关，因此研究肝素对不同疾病的量效关系，找出其对不同疾病的最适剂量，必将能够扩大这类药物的临床应用)因此研究低剂量及超低剂量肝素的定量分析方法有重要意义)肝素的测定常用的是生物方法［!］，此外，分光光度法［@NM］、BOK7法［"］、毛细管电泳法［P］、电化学传感器法［Q］也应用于肝素的测定)分光光度法由于操作简便、快速、仪器价廉、灵敏度较高的优点而得到广泛的应用)因此进一步研究灵敏度高、选择性好的新分光光度法有重要的意义)

4、笔者的实验结果发现，在ABRMC$Q的E-822’.FG’H8.6’.缓冲溶液中，碱性三苯甲烷染料结晶紫与肝素发生缔合，使溶液出现明显的褪色，最大褪色波长为#Q%.9，此处溶液吸光度的降低与肝素钠浓度成正比，由此建立了测定肝素浓度的分光光度法)该方法的线性范围为$D!C?肝素，摩尔吸光系数为@C?#"IJ9KMN%·=9N%，具有良好的线性关系（!R$CQQQ!）)本文主要讨论该方法的光谱特征、适宜的反L%$K·9’(应条件；研究了表面活性剂及共存物质的影响)用于肝素钠注射液效价的测定，结果满意)(实验部分(%(仪器和试剂:&FP#$$紫

5、外F可见分光光度计（天美公司）；"!!光栅分光光度计（四川仪表九厂）；OB1F@7酸度计（上海大中分析仪器厂）)结晶紫（上海崇明县裕西试剂厂）：$C$%S水溶液，干法过滤，保留滤液，备用)肝素钠（效价为%M$T:J9I，中国医药集团上海化学试剂公司）标准溶液：配制%9IJ9K的贮备液，冰箱保存，用时稀释为%$!收稿日期：!$$%$#@%作者简介：徐红（%Q"$），女，贵州省凯里市人，讲师，现在贵阳医学院工作，主要从事有机化学和分析化学的研究)G@3西南师范大学学报（自然科学版）第:G卷缓冲溶液（0123456）：5457#*8"$混和酸溶

6、液955#$和54:#*8"$;<=1溶液7:4>!!"#$%&’())*+,-*.(+/*+#$混和，然后在酸度计上调整至0123456%所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水%!"#实验方法取一定量肝素于:>#$比色管中，依次加入0123456缓冲溶液945#$，5459?结晶紫溶液@45#$，二次水稀释至刻度，摇匀静置9>#(+%然后用9A#比色皿于>69+#处，以试剂空白为参比，测定吸光度，其中试剂空白记为!5，含有肝素者记为!，计算!!2!5B!%#结果与讨论#"!吸收光谱按实验方法配制溶液后，于CDE>55紫外,可见分光光度

7、计上扫描吸收光谱，7:5FG55+#范围的吸收光谱如图（9H，&）所示%由图可知：若以水为参比，结晶紫在>69+#处有一强吸收峰，当加入肝素后呈现褪色反应，>69+#处的吸光度随肝素加入量的增加而明显下降（图9,H）；若以试剂空白为参比，当加入肝素后，在>69+#处有一强负吸收峰，并在>59+#和3>9+#处出现:个新的正吸收峰，这是肝素与结晶紫生成的缔合物引起的，但强度较弱（图9,&）%因此选择>69+#为测定波长，利用褪色法来测定肝素%94试剂空白；:4［1I0］：54E!!"#$；@4［1I0］：943!!"#$H：以二次水为参比；

8、&：试剂空白为参比图9吸收光谱J(!49H./*’0)(*+K0IA)’<#"#酸度的影响用一系列不同01值的&’())*+,-*.(+/*+缓冲溶液，试验了溶液01值对吸光度的影响，结果如图