枯草芽孢杆菌液态培养条件优化及其代谢产物分析

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1、酿酒科技2010年第8期（总第194期）·LIQUOR－MAKINGSCIENCE＆TECHNOLOGY2010No．8(Tol．194)43枯草芽孢杆菌液态培养条件优化及其代谢产物分析姚翠萍，王和玉，杨帆，林琳，王莉(贵州茅台酒股份有限公司技术中心，贵州仁怀564501)摘要：从茅台酒生产环境中分离纯化得到1株枯草芽孢杆菌，对该菌株培养基的小麦粉浓度、初始pH值、培养温度三因素进行正交实验，确定其最适培养条件，并分析在该培养条件下所产代谢物。实验确定的最适培养条件为：小麦粉1.5%，初始pH7.0，培养温度35℃，培养时间12h

2、，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，氯化钠1%，磷酸氢二钾0.5%。利用气质联用色谱仪分析其代谢产物，检测到30多种物质，主要为酸、酯类物质。关键词：微生物；茅台酒；枯草芽孢杆菌；正交实验；优化；代谢产物；分析中图分类号：TS261.1；Q93-3；TS262.33文献标识码：A文章编号：1001－9286（2010）08－0043－03OptimizationofLiquidCultureConditionsforBacillussubtilisandAnalysisofItsMetabolitesYAOCui-ping，WANGHe

3、-yu,YANGFan,LINLinandWANGLI(TechnicalCenterofGuizhouMaotaiCo.Ltd,RenHuai，GuiZhou564501,China)Abstract:ABacillussubtilisstrainwasisolatedfromtheproductionenvironmentofMaotailiquor.Inordertodetermineitsoptimumculturecon-ditionsandanalyzeitsmetabolites,orthogonalexperime

4、ntsofthreefactorsincludingwheatpowercontent,initialpHvalue,andculturetempera-tureoftheculturemediumwerecarriedout.Theoptimumcultureconditionsweredeterminedasfollows:1.5%wheatpower,initialpH7.0,cul-turetemperatureat35℃,culturetime12h,peptone1%,yeastextract0.5%,NaCl1%,a

5、ndK2HPO40.5%.Morethanthirtykindsofmetabo-litesmainlyincludingacidsandlipidsweredetectedbyGCanalysis.Keywords:microbe;Maotai-flour;Bacillussubtilis;orthogonalexperiment;optimization;metabolites;analysis枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）是一种重要的工业基础培养基：蛋白胨1%，酵母膏0.5%，氯化钠[1]微生物。它大量存在

6、于茅台酒生产环境中，在茅台酒酿1%，磷酸氢二钾0.5%。造过程中发挥着重要作用，是茅台酒酿造微生物种群中1.3菌体称重的优势菌。曾报道枯草芽孢杆菌与酱香的产生有着密切将干离心管称重并记录，量取10mL发酵液，于[2]关系，而对其在茅台酒发酵过程中具体代谢产物，对茅4000r/min离心10min，去上清液，烘干，称重并记录，计台酒风味物质贡献尚无文献描述。因此，本实验从茅台酒算干菌体重。生产环境中分离出1株枯草芽孢杆菌，研究其在优化液1.4发酵液吸光度测定态培养条件下的代谢产物，了解它对茅台酒风味物质成将枯草芽孢杆菌发酵液稀释10

7、0倍，以空白培养基分的贡献，同时，对该菌株代谢产物分析也是研究茅台酒为空白对照，在波长600nm处测定其吸光度。风味物质成因的重要组成部分。本文主要通过优化该菌1.5分析仪器株的液态培养条件，了解该菌株的一些生长特性，分析其AgilentGC7890A-5975Cmassselectivedetector代谢产物，是研究枯草芽孢菌对茅台酒风味物质成分贡(MSD)。献的重要开端。1.6提取方法培养结束后，取一定量液态发酵样品，加入一定量1材料与方法50%vol乙醇溶液冷冻24h，采用乙醚进行液液萃取，再1.1菌株将萃取液氮吹浓缩，进

8、入仪器GC-MS分析检测。枯草芽孢杆菌，从茅台大曲中分离得到。1.7仪器条件1.2培养基气相色谱分离条件：柱温的初始温度为40℃，以收稿日期：2010－05－24作者简介：姚翠萍（1985-），女，助理工程师。44酿酒科技2010年第8期（总第19