114-兔碱性成纤维生长因子 BFGF ELISA

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1、兔碱性成纤维生长因子BFGFELISA用途：本试剂盒用于定量检测兔血清中的BFGF的浓度。原理：本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗兔BFGF单抗包被于酶标板上，兔标本中的BFGF会与单抗结合。加入生物素化的抗兔BFGF（二抗），它将与结合在单抗上的兔BFGF结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。兔BFGF的浓度与OD(450nm)成正比。试剂盒组成：酶标板(CoatedWells)48wellsAnti-rab

2、bitBFGFBiotin1vial浓缩洗涤液(40X)(WashingConcentrate)12.5ml标准品(Standards)1vial显色液(TMBSubstrate)6ml标准品稀释液(StandardDiluent)7ml终止液(StopSolution)5ml浓缩酶联物（HRP）1vial酶联物稀释液(HRPDiluent)7ml生物素稀释液(BiotinantiBFGFDiluent)7ml需要但未提供的材料1.可在450nm处进行读数的酶标仪；2.能精确吸取10-200µL的移液器；3.可调多

3、道（8）移液器（50－200µL）；4.供可调多道移液器使用的试剂存放槽；5.洗瓶或洗板机；6.蒸馏水或去离子水；7.1升的圆柱形量筒；8.移液器：1和（10或25mL）；9.移液器枪头；10.纸巾；11.计时器，用以监控温育步骤；12.处理池和消毒剂（例如：0.5%次氯酸钠,10%家用漂白水）；注意事项:1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要

4、让微孔干燥掉。3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。6.在储存和温育时避免强光直接照射。7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。9.不能使用过期产品。10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。保存：贮藏于2-8°C。样品：在此检测中，可使用血清

5、样品。准备工作：1.浓缩洗涤液(40X)用双蒸水稀释成1X（至500ml）。2.标准品用1ml标准品稀释液复溶。得到1200pg/ml的高浓度标准品。高浓度标准品可保存于-20°C。3.将1200pg/ml的高浓度标准品稀释成一组标准品，如：600,300,150,75,37.5,0pg/ml。4.配制1xHRP：一支HRP加入6ml酶联物稀释液，混匀。1xHRP最好在临用前15分钟配制。5.配制1xBiotin：一支BiotinantirabbitBFGF加入6mlBiotin稀释液，混匀。1xBiotin最好在

6、临用前15分钟配制。操作步骤：试剂盒应平衡至室温（20-25°C）再试验。取出所需反应板。ò临用前15分钟配制工作液1.加入100ul标准品(Standards)、100ul血清于相应反应板孔中。2.轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育60分钟。3.洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。4.每孔加入100ul1xBiotin。轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育60分钟5.洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul

7、洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。6.每孔加入100ul1xHRP。轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育30分钟7.洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。8.每孔加入100ulTMB显色液，轻轻混匀10秒，37°C暗处温育15±10分钟。9.每孔加入100ul终止液（StopSolution)。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的OD

8、值可在标准曲线上查出其浓度。举例：1.210.80.60.4OD(450nm)0.200200400600800Conc.ofrabbitbFGF(pg/ml)注意事项：1.作标准曲线时，要扣除标准品稀释液造成的本底；如果标本用标准品稀释液稀释，也要扣除标准品稀释液造成的本底，如果标本未用标准品稀释液稀释，标本不需扣除标准品稀释液造成的本底。2.生物素(Bi