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1、第31卷分析化学(FENXIHUAXUE) 研究简报第2期2003年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry208～211茶叶中咖啡因的纸基质室温 光法体内药代动力学研究3卫艳丽 姚建国 李建晴 董 川(山西大学化学化工学院,太原030006)摘 要 以快速定量滤纸为基质,用KI2NaAc为重原子微扰剂建立了测定痕量咖啡因的滤纸基质室温 光(PS2RTP)分析法。并用于茶叶中咖啡因的测定及其在人体内的药代动力学研究。实验表明:PS2RTP法用于茶叶中咖啡因的测定准确、灵敏。受试者饮茶后1～2h
2、尿样中咖啡因排泄达高峰,24h后基本排泄完毕。咖啡因的尿排泄量占总摄取量的64.25%。关键词 咖啡因,室温 光分析,药代动力学1 引 言茶叶中含丰富的维生素、氨基酸、咖啡因、茶碱、茶单宁等多种对人体有益的成分。其中咖啡因的含12量为3%～5%,咖啡因(caffeine,CF)是黄嘌呤甲基衍生物,具有兴奋、利尿、松弛平滑肌等作用。目3～5前,CF的尿药浓度测定方法主要有配有紫外检测的各种色谱法。PS2RTP法是一种新型的微量技术与痕量分析相结合的分子发射光谱技术。具有操作简便,取样量少(μL级),灵敏度高(比吸光光度法高3个
3、数量级),检出限低(一般绝对检出限达ngP斑),选择性好等特点,很适于茶叶中CF的痕量分析。李6建晴等已将此方法用于氧氟沙星在人体内的药代动力学研究,结果准确可靠。而利用PS2RTP法研究CF在人体内的药代动力学尚未见文献报道。本文详细研究了混合重原子微扰剂KI2NaAc对CF产生PS2RTP的影响,以及酸度、重原子浓度、干燥时间等适宜条件的选择,建立了测定痕量CF的PS2RTP法。该方法快速、方便、准确。并将此方法用于茶叶中CF含量的测定及CF在茶叶和尿液中的回收等研究,在此基础上对CF的药物代谢动力学进行了研究,为茶叶中C
4、F在人体内的代谢规律研究提供了新的途径。2 实验部分2.1 试剂和仪器-3CF标准品(Sigma公司)于100℃下烘烤1h,配制成5×10molPL的储备液,使用时用pH=5.1的-4Britton2Robinson缓冲溶液稀释成1×10molPL工作液。其它试剂均为分析纯,用二次重蒸馏水配制。F24500型荧光分光光度计(日本日立公司),附 光配件;室温 光样品架和红外灯干燥装置,本实验室自制;pHS22型酸度计(上海第二分析仪器厂);5μL无存液进样器(上海医用激光仪器厂);快速定量滤纸(中国杭州新华造纸厂)。2.2 实验
5、方法72.2.1 茶汤的制备 文献报道,茶叶与水的重量比在1∶40～1∶100之间为宜。本文选取茶叶与水之比为1∶50。即准确称取适量茶叶先冲入100倍的沸水中,15min后倒出第一道茶汤,再冲入50倍的沸水,浸泡15min后倒出第二泡茶汤,合并两次的茶汤,测量时用pH=5.1的Britton2Robinson缓冲溶液稀释10倍。2.2.2PS2RTP的测量 将滤纸裁成17mm×14mm的纸条,在光斑照射处刻一划痕,标记点样位置。用微量进样器取重原子微扰剂KI2NaAc(2P0.5molPL)的混合溶液5μL一次加在点样位置,
6、在红外灯(95℃)下预烘烤30s后取出,再在同一位置加样品溶液(pH=5.1)4μL,继续干燥2.5min后取出,盖上石英片立即置于室温 光样品架上,在激发和发射通带均为5nm下,进行CF的PS2RTP测量。2002203218收稿;2002207208接受本文系国家自然科学基金(No.20275022)和山西省自然科学基金(No.20011010)第2期卫艳丽等:茶叶中咖啡因的纸基质室温 光法体内药代动力学研究2093 结果与讨论3.1 条件确定3.1.1 咖啡因的PS2RTP光谱 分别扫描CF标准品、茶汤、尿样空白及滤纸背
7、景的PS2RTP光谱,结果见图1。由图可见,CF纯品和茶汤的最大激发波长λex都在277nm处,最大发射波长λem都在440nm处,其Stokes位移Δλ=163nm。另外实验也表明CF的最大荧光发射峰λem位于397nm处,可见,CF的PS2RTP光谱较其荧光光谱红移43nm,从而使其选择性得到大大提高。另外可以看出,在CF最大发射波长处,尿样和滤纸有微弱 光产生,即尿样和滤纸有一定的室温 光本底值。故测量时,应采用扣除空白值的方法加以校正。3.1.2 酸度效应 酸度对PS2RTP强度有较大影响。 图1CF及茶叶的PS2RT
8、P光谱结果表明:CF的PS2RTP信号在较宽的pH(2～8)范Fig.1Papersubstrateroomtemperaturephosphorescence围内变化不大。而在pH<2和pH>10时,有一定猝spectraofcaffeine,teaandurine灭。本实
