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《石蜡组织荧光原位杂交关键实验步骤探讨_李江超》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物技术通讯398LETTERSINBIOTECHNOLOGYVol.24No.3May,2013doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2013.03.024技术方法石蜡组织荧光原位杂交关键实验步骤探讨12111331李江超，卢玉芬，兰天，章倩倩，亓翠玲，陈金娜，关新元，王丽京1.广东药学院血管研究所，广东广州510006；2.桂林医学院生物技术系，广西桂林541004；3.香港大学临床肿瘤研究部，香港［摘要］目的：探讨石蜡组织荧光原位杂交（FISH）技术中关键实验步骤的最佳条件，以期提高石
2、蜡切片FISH阳性细胞检出率和实验成功率。方法：在前期标本处理方面，进行双蒸水、0.5×SSC溶液、0.1%硫代亚硫酸钠溶液煮沸对比；在蛋白酶消化方面，设置胃蛋白酶和蛋白酶K两种消化方法，并在37℃条件下设置时间的梯度变化，比较其消化效果；对石蜡切片的变性设置温度梯度，比较杂交检出率；比较DAPI复染时不同浓度对单色、双色FISH结果的影响；应用抗淬灭剂后不同保存时间的对比。结果：采用0.5×SSC溶液煮沸15min，用200μg/mL蛋白酶K在37℃、6~10min条件下消化，可以取得较好的FISH效果；变性
3、温度为81℃时检出率更高，DAPI复染浓度为1000ng/mL时针对单色FISH较合适，而浓度为500、150ng/mL时针对双色/多色FISH有较好的效果。结论：FISH条件经过对比得到优化，对石蜡组织FISH实验具有一定的指导意义。［关键词］石蜡组织；荧光原位杂交；蛋白消化；DNA变性；DAPI染色［中图分类号］Q503［文献标识码］A［文章编号］1009-0002（2013）03-0398-04ComparativeStudyontheDifferentStepofFluorescenceinSituHy
4、⁃bridizationinParaffinSlides1211LIJiang-Chao,LUYu-Fen,LANTian,ZHANGQian-Qian,1331QICui-Ling,CHENJin-Na,GUANXin-Yuan*,WANGLi-Jing*1.GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006;2.GuilinMedicalUniversity,Guilin541004;3.De⁃partmentofClinicalOncology,Univer
5、sityofHongKong,HongKong;China*Co-correspondingauthor,WANGLi-Jing,E-mail:wanglijing62@163.com;GUANXin-Yuan,E-mail:xyguan@hkucc.hku.hk［Abstract］Objective:Toobtaintheoptimalmethodsofthefluorescenceinsituhybridization（FISH）,forincreas⁃ingsuccessrateinFISHdetecti
6、on.Methods:Therewerethreekindsofsolutionincludingwater,0.5×SSCbuffer,0.5%sodiumthiosulfatesolution,whichwereusedtoboiltheslides,thencomparingtheexperimentereffectwitheachother.TheproteinaseKandpepsinwereadoptedtodigesttheslidesat37℃,setupdifferenttimepointto
7、findtheoptimumresults.AboutDNAdenaturationofparaffinslides,wesetdifferenttemperaturetocomparedthedetectionrate.Inaddition,wealsouseddifferentconcentrationofDAPItostainingthecellnucleus.Toobservedyeingeffectofnuclei,weusedfluorescentquenchesagenttoconfirmthep
8、reservedeffecttoclearhowlongthefluorescentisgood.Results:The0.5×SSCbufferfortreatingtheslideswasmoreeffectivesolution.TheproteinaseKwasanidealdigestiveproteinat37℃,time6~10min,thedigestiondegree
