使用AKTA™ AVANT25进行MAB纯化的快速工艺过程研发

《使用AKTA™ AVANT25进行MAB纯化的快速工艺过程研发》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、..TM使用AKTAavant25进行MAb纯化的快速工艺过程研发..UNICORNTM6软件控制的AKTATMavant25系统，用UNICORN方法输入设计设计和快速探索运行模型评价于研发单克隆抗体（MAb）纯化的两步色谱工艺过使用模型进行TM程。MabSelectSuRe，基于蛋白A的色谱柱料（合成预测和判定输入设计树脂），用来进行初始的捕获步骤；而多模式阴离子TM交换剂Captoadhere，用来进行第二步精制步骤，减因子、因子类型和设置的定义创建设计目标的定义少不纯物。在精制步骤采用实验设计（DOE）筛选上样条件，变化样品的pH、电导率和上样量。使用1毫TM升预装的HiTrap柱子

2、，设计运行时间少于24小时，简化的设计实施确立了工艺过程条件的稳健性。将功TM能性整合在UNICORN6软件的实验设计（DoE），与图1嵌入实验设计功能的UNICORN6软件，为简便快速的TM工艺过程研发而设计。在实验功能设计中，多因子同时变HiScreen一起使用，在大约一周的时间内将所有的工艺过程进行了优化。尽管料液研究具有挑战性，靶化，结果数据用来生成统计模型。模型经过验证后，用来产生等位图为判定提供帮助。MAb的高产率和纯度都达到了目的。细胞培养筛选Captoadhere上样条件的实验设计细胞去除已知电导率、pH和样品上样量是CaptoadhereMabSelectSuRe样品上样的

3、重要参数（1）。设计一种实验设置可病毒灭活以同时检测许多不同的条件(因子)。使用实验设计病毒过滤(DoE)，可以较好的达到这个目的，实验设计利用统计学辨认和定义对于工艺过程/产品有最重要影响的SPSepharoseFastFlow/CaptoSCaptoQ*Captoadhere因子。为了获得最大的信息，认真选择设计数套实CaptoadhereCaptoadhere验，其中所有的相关因子不同而且同时被评估。在最终过滤、超滤/渗滤池方法优化中，使用实验设计极大的增加了真实的最无菌过滤佳纯化确立的可能性。*WO2004/076485在这个研究中，包含在UNICORN6中的完全因子图2经典的三步抗

4、体纯化策略，应用MabSelectSuRe,SP实验设计(DoE)，用来进行Captoadhere样品上样条件TMSepharoseFastFlow,和Captoadhere(左边的箭头)；基于的筛选(参见表1步骤6)。该完全因子实验设计含有三MabSelectSuRe和Captoadhere(中间的箭头)的两步策略；用于3个参数(样品上样量、电导率和pH)，就是2=8个实验精制步骤的另外的Capto柱料三步策略(右边的箭头)。和三个中心点，总共11个实验。表1不同柱子和使用条件的总结步骤编号描述和目的柱子缓冲液1MabSelectSuRe的洗脱pH的判定HiScreenMabSelectS

5、uRe20mM柠檬酸盐，pH6.0到3.02MabSelectSuRe的动态结合载量的判定HiTrapMabSelectSuRePBS，pH7.4和柠檬酸盐，pH3.53MabSelectSuRe的MAb的纯化HiScreenMabSelectSuRePBS，pH7.4和柠檬酸盐，pH3.54Captoadhere精制步骤的材料制备(规模放大)装有MabSelectSuRe的XKPBS，pH7.4和柠檬酸盐，pH3.550/20柱子(柱床高度=8.4厘米,Vc=165毫升)5Captoadhere上样条件的判定HiScreenCaptoadhere20mM磷酸钠，20mM柠檬酸盐，pH7.8

6、到4.06Captoadhere上样条件筛选的实验设计(DoE)HiTrapCaptoadhere20mM磷酸钠，20mM柠檬酸盐，pH7.5,6.75,和6.07Captoadhere的稳健性研究HiTrapCaptoadhere50mM磷酸钠，pH6.95，6.75和6.55图3Captoadhere步骤条件筛选的实验设计结果。分析的三个反应分别是回收率、宿主细胞蛋白、二聚体和聚合物。结果以三种不同的方式进行了可视化展示：“数据模型吻合小结（Summaryoffit）”、“系数图（Coefficientplot）”和“等值线图（Contourplots）”。图3总结了实验设计筛选的结果。

7、通过使用性，一些无关紧要的系数也予以保留。“数据模型吻合小结（Summaryoffit）”、“系数图等值线图显示两个因子对于特定响应值的效应。（Coefficientplot）”和“等值线图（Contourplots）”，正如期望的一样，增加上样量，回收率越高，结果以三种不同的方式进行了可视化展示。分析了三而污染物清除率在较低上样量时有所改善。个响应值，回收率、宿主细胞蛋白去除、二聚体和聚合物（D/A）去除。第