快速蛋白质液相层析(FPLC)

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1、快速蛋白质液相层析（FPLC）编制者：崔恒林ÄKTApurifier100是快速分离肽、核酸和蛋白的全新液相色谱系统，全机流路采用PEEK惰性塑料，流速范围宽广，为0.01-100ml/min。除了操作简单，大量应用工艺和方法模板外，AKTApurifier还加进了很多尖端功能去缩短实验准备和运行所需时间，大大提高实验结果的可靠性和重复性。仪器的主要技术参数：泵流速为0.01-100ml/min；最大耐压为600psi(40bar)；紫外检测范围为0.01-5AU；波长选择有254nm和280nm；温度范围为4-60℃；电导率范围为1us/cm-999.9ms/cm。系统组成：

2、本系统由控制系统（MonitorUPC-900）、泵（Pump-901）、混合仪（MixerM-925）、进样阀（ValveINV-907），紫外检测仪和部分收集器（Frac-920）等部件组成。系统特点1、高压：供液压力和进样压力都很高，一般可达0-5Mpa。2、高速：载液在色谱柱内的流速比经典液相色谱高很多，可达0-100ml/min。3、高效：由于采用了新型的固定相,提高了分辨率。4、高灵敏度：采用了基于光学原理具有高灵敏度的检测器，之外吸收检测，灵敏度可达到10-9g/ml数量级。5、梯度洗脱：洗脱液的组成可以是连续变化的，增加了洗脱强度，缩短了分析时间。使用注意事项与

3、维护保养虽然ÄKTApurifier100的自动化程度极高，但该仪器极易受外界因素的影响甚至损坏，使用该仪器必须严格按使用规范和操作手册进行。1、开机。确认将ÄKTApurifier100主机与电脑电源连接在稳压电源输出端。先开ÄKTA，后开电脑。2、关机。确认退出所有程序后，关闭电脑后关闭ÄKTApurifier100主机电源。3、所有流动相和样品均应用0.22微米孔径滤膜过滤，以防堵塞纯化柱。4、所有管路均应保存在20%乙醇中，防霉防菌。15、系统泵循环洗涤管应置于20%乙醇中，定期更换，以保护泵头。基本操作1、进样方法选择自动运行Run/InstantRun——运行预编好

4、的方法(Run)或直接运行模板(InstantRun)。手动运行Manual——利用手动窗口(Manual)，手工执行系统命令。自动加手动——在自动运行过程中可同时执行手动命令如有冲突，以后执行的命令为准。2、方法编辑编辑方法(MethodWizard,RunSetup,TextInstruction)；编辑层析柱列表(ColumnList)；编辑缓冲液配方(BufferPrepReceipt)。3、运行启动自动运行；手动运行。4、收集方式收集器自动收集样品；手动收集样品；收集器自动峰收集。5、结果处理文件管理；积分；曲线操作6、结束实验实验结束后，必须运行系统泵管清洗后，才能

5、关机。操作实例——脱盐1、洗泵。更换样品对应的buffer，运行pumpwash，25ml约1.5min。2、装柱。调流速至1ml/mi，alarmpresure为0.3mpa。将进水导管连接至柱入水端，取下柱出水端堵头，当buffer流出时，将柱出水端接入固定架。3、平衡柱子。调流速至3ml/mi。用平衡buffer清洗loop进样环。4、上样。用注射器取样、排气后推入loop进样环。25、调零。6、数据保存设定。点击Recordon，注意本次即将运行样品后的数据保存的位置，并注意运行后及时将数据复制至安全位置，否则超过10个后，会被后续运行样品数据覆盖。7、设定样品收集方式

6、。主要有收集器自动收集样品、手动收集样品、收集器自动峰收集等，根据样品和个人喜好确定。8、进样运行。点击inject运行，注意收集器是否运行。3