微澡炼油综述

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1、从微藻中提取粗脂的方法综述摘要：微藻是指那些只有在显微镜下才能辨别形态的微小藻类。部分微藻富含油脂。微藻油脂提取步骤大致包括破胞处理、分离提取。大致方法有超声破碎处理、冻融破碎处理和石油醚—乙醚、异丙醇法、氯仿—甲醇法。本文大致叙述了这几种方法的原理和操作。关键词：微藻油脂提取反复冻融石油醚乙醚一、引言微藻是指那些只有在显微镜下才能辨别形态的微小藻类，在陆地、海洋分布广泛，营养丰富、光合利用度高的自养植物。部分微藻中含有数量相当可观的油脂类物质，可以直接提取得到微藻油。而微藻油可以用来生产生物柴油。例如，小球藻（Chlor

2、ella）为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞淡水藻类，直径3～8微米，是地球上最早的生命之一,出现在20多亿年前，基因始终没有变化，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，分布极广。有数据表明：机械搅拌发酵罐中大规模异养培养小球藻，最高细胞十重浓度达到了43．3g／L，总油脂含量也可高达57.7％。在世界能源危机和环境污染的双重影响下,生物质能源由于可再生、低污染等优势,被认为是在未来一个较短时期内最有潜力缓解能源危机的石油替代品。而微藻由于具有生物量大、光合效率高、生长周期短、油脂含量高和环境友好等优点

3、,有望破解后石油时代的能源危机，藻类尤其是微藻类将会成为提供新能源和新资源的“明星”,微藻的能源化利用有望成为“后石油时代”破解能源危机的一把金钥匙。在最近两年,不管是国内外有关利用微藻生产生物燃料的基础研究,还是应用开发报道都呈现大幅增长的态势。但是微藻油脂是胞内产物，如何实现有效的破碎藻细胞以充分释放并高效率地提取出来是急需解决的一个关键性问题。目前业内关于微藻油脂破碎提取还没有一个统一的定论，各种方法都有各自的缺点，本文通过查阅大量文献，总结比较几种典型的微藻破碎提取方法。二、微藻提取方法及操作1、微藻油脂提取过程框

4、图微藻油脂提取大致分为浓缩、破胞、油脂提取三部分，微藻油脂提取过程如图一。分离提取破胞处理离心浓缩微藻油脂破碎藻液浓藻液微藻培养液图一微藻油脂提取过程框图2、破胞处理方法及操作微藻油脂为胞内产物，在提取之前必须将微藻进行破碎处理，以将微藻胞内产生的油脂释放出来，再进行下一步提取操作。1>超声破碎处理：超声波是一种弹性机械振动波，是听觉阈以外的振动，它产生强烈振动，高速度、强烈的空化效应，搅拌作用，因此能破坏细胞的完整性，使细胞内的活性组分渗透到胞外，以提高有效成分的提出率．取待处理藻液20mL，在冰浴，超声功率400W条件

5、下超声处理，以破碎前后显微镜下观察完整细胞的个数计算细胞破碎率，每个条件平行计数4次2>冻融破碎处理：反复冻融是借助于冰晶在胞内外的分布不均和冰晶的成长对细胞所造成的机械伤，将待处理藻液一20℃温度下冷冻，40℃温水浴中融解5min，反复2次，以破碎前后显微镜下观察完整细胞的个数计算细胞破碎率，每个条件平行计数4次。超声波法适合于对大多数藻细胞的破碎，其破碎率明显高于反复冻融法．生长在温度较高环境下的微藻细胞比较适合用反复冻融法进行破碎．反复冻融法对藻细胞进行破碎，虽然处理的时间长，但处理量大，在整个处理过程中始终保持较低

6、的温度，特别适合于热敏性的活性物质的提取前预处理。3、油脂分离提取方法及操作油脂提取一般采用有机溶剂萃取的方法，利用油脂能溶于有机溶剂的特点，然后根据不同的沸点可以把油脂蒸馏出来。一般来说，所用有机萃取剂的沸点没有油脂的高。1>改良的酸水解法:称取湿藻体或干藻粉1g，置于50mL带盖离心管中，加入4mL灭菌蒸馏水，混匀后加入5mL盐酸，将离心管置于70一80℃水浴中20min，取出离心管，加入5mL95％的乙醇，混匀。冷却后加入10mL乙醚，加盖振摇1min，小心开盖，放出气体。4000r／min离心2min，吸取上清液于

7、已恒重的锥形瓶中，再加5mL乙醚于离心管中，加盖振摇1min，4000r／min离心2min，吸取上清液于原锥形瓶中。将锥形瓶置于水浴锅上蒸干，再置于95—105℃烘箱中干燥2h，取出冷却后称重，计算微藻中油脂得率。2>石油醚—乙醚：乙醚-石油醚（1：2）体积比为1：3的比例向1份匀浆液中加入3份乙醚-石油醚（1：2），在混合器中，30min定时高强度搅拌，萃取时间5h。4000r／min离心5min，吸取上清液于已恒重的锥形瓶中，将锥形瓶置于40℃水浴锅上蒸干，再置于95～105℃烘箱中干燥2h，取出冷却后称重，计算微藻

8、中油脂得率。3>异丙醇法：称取湿藻体或干藻粉lg，置于10mL离心管中，加入5mL异丙醇(60℃预热)，室温下萃取10h，4000r／min离心2min，吸取上清液于已恒重的锥形瓶中，再向离心管中加入5mL异丙醇，室温萃取lh，离心吸取上清液于原锥形瓶中。将锥形瓶置于水浴锅上蒸干，再置于95～105℃烘