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《LC-20A高效液相色谱仪使用注意事项及故障处理》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、一、LC-20A高效液相色谱仪功能和用途：1、功能：本仪器采用高压梯度通过高压输液泵分别独立精确控制流量、调整溶剂浓度比例，实现高效率、高精度混合；即配备了可提供全波长三维信息的二极管阵列检测器，全新的光路设计与有效的梯形狭缝池设计保证了高分辨率和高灵敏度；也配备了灵敏度更高、选择性更好的荧光检测器；还配备了具有高灵敏度、检测范围更广的蒸发光检测器。2、用途：本仪器可以高效地分离分析高沸点、热不稳定的有机及生化试样；二极管阵列检测器对大部分有机化合物有响应；荧光检测器可以检测产生荧光的物质，对如多环芳烃、维生素B、黄曲霉
2、素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；蒸发光散射检测器对碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油和挥发性低于流动相的任何样品、不含发色团的化合物有响应。二、LC-20A高效液相色谱仪使用注意事项1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然
3、后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。5、长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。6、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。7、C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。8、堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。9、气泡会致使压力不稳，重现性
4、差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。10、如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。11、要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。12、更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。三、诊状可能的原因及解决方法(1)保留时间变化1、柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2、等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3、缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4、柱污染每天冲洗柱5
5、、柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6、柱快达到寿命采用保护柱(2)保留时间缩短1、流速增加检查泵,重新设定流速2、样品超载降低样品量3、键合相流失流动相PH值保持在3"7.5检查柱的方向4、流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5、温度增加柱恒温(3)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失同前(2)34.流动相组成变化同前(2)45.温度降低同前(2)5(4)出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第
6、一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(5)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(6)基线噪声1.气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机
7、噪声)清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声)采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(7)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(4)45.同前(4)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(8)峰展宽1
8、.进样体积过大同(4)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度
