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1、中国生物工程杂志ChinaBiotechnology,2008,28(7):116～121综述3卵母细胞质量评定方法33徐盛玉吴德王定越(四川农业大学动物营养研究所四川省动物营养与饲料工程重点实验室雅安625014)摘要在辅助生殖领域及繁殖科学中常涉及对卵母细胞质量的评定,据卵母细胞发育过程中的结构变化和生化变化,卵母细胞的质量评定主要涵盖对卵母细胞形态和成熟度的考察。从非侵袭性技术和侵袭性技术分析的角度论述了卵母细胞质量评定的方法,为合理评价卵母细胞质量提供了多种有效途径。关键词卵母细胞非侵袭性技术
2、侵袭性技术质量评定中图分类号Q2在合子形成过程中,精子和卵细胞都提供了遗传育及成熟过程中超微结构的变化非常重要。物质。除此之外,卵细胞还为早期胚胎的发育提供了1.1卵母细胞质膜、透明带与卵周隙大量必需的营养物质。因而,作为卵细胞的发生基础,由单层扁平颗粒细胞包围的卵母细胞,质膜表面光卵母细胞质量的高低直接关系到合子发育甚至是新生滑并与颗粒细胞膜相贴,之间有桥粒连接。由立方颗粒个体一生的命运。大量的试验研究也表明,卵母细胞细胞包围时,卵质膜上开始出现短小的微绒毛。当颗粒质量的好坏将直接影响卵细胞的受精率
3、、受精卵的卵细胞变成两层时,开始出现透明带,微绒毛伸人透明带裂率、早期胚胎的存活、妊娠的建立和维持、胎儿的发内。卵泡腔出现时,透明带增厚,此时微绒毛多且长并垂育,甚至成年后的健康问题。因此,选择高质量卵母细直插入透明带内。直径为2mm的牛卵泡和0.5～1.0mm胞对于辅助生殖及体细胞克隆等技术来说至关重要,的山羊卵泡中的卵母细胞,透明带内的微绒毛开始缩短而如何来评价卵母细胞的质量则成了辅助生殖技术领变粗,并逐渐从透明带退出。卵母细胞成熟后,微绒毛则域及繁殖科学面临的一个关键问题之一。[1,2]全部倒伏
4、在卵的表面。卵母细胞第一次成熟分裂后,卵母细胞质量的评定工作各国学者的方法标准不排出第一极体,卵细胞质收缩,卵黄膜和透明带之间出现一,不利于进一步研究。本文就卵母细胞的质量评定一个小的裂隙,称卵周隙或围卵腔。方法从非侵袭性技术和侵袭性技术分析的角度进行讨1.2细胞器的变化论,旨在为卵母细胞质量的高效评定工作提供参考。卵母细胞生长发育过程中细胞器的变化最为显著。总的变化规律为:大多数细胞器最初分布于近核1卵母细胞发育及成熟过程中结构的变化区,随着卵母细胞的生长发育,线粒体、高尔基体、粗面卵母细胞质量的评
5、定主要是分析卵母细胞的形态内质网、皮质颗粒等细胞器不断丰富和增多,并逐渐向结构和其成熟度,评定的基础是卵母细胞在生长发育皮质区迁移,在细胞中央形成不含细胞器的“透明过程中的结构变化和生化变化,因此了解卵母细胞发区”[3,4];卵母细胞成熟后,除皮质颗粒外,其他的细胞器又向卵子中央迁移,最终高尔基体和内质网消失,线收稿日期:2008201230修回日期:2008204214[5～7]粒体则分散在胞质中。3教育部创新团队计划(IRT0555)、国家自然科学基金(30471257)资助项目1.3细胞核的变化
6、33通讯作者,电子信箱:pig2pig@sina.com生发泡期(GV期)卵母细胞,在促性腺激素作用下2008,28(7)徐盛玉等:卵母细胞质量评定的方法探讨117恢复减数分裂,光镜下可见细胞核膜破裂,核仁消失,核有关的mRNA和蛋白的储存相关。以上研究表明卵泡内物质与核质混合,此过程即为生发泡破裂(GVBD)。越大、成熟度越高,其中的卵母细胞质量越高。卵母细胞在成熟发育过程期间,其染色体(二倍2.2卵周隙、第一极体的形态建立的评价方法体)经历了中期I、后期I和末期I,排出第1极体后停卵母细胞成熟过程
7、中经历两次减数分裂,排出极[8][2]滞于第二次减数分裂中期(MII)。研究牛和山羊体形成卵周隙。极体的排出表明卵母细胞发育经历了发现,从单层颗粒细胞包围的卵母细胞到早期有腔卵正常的程序;而卵周隙越大,表明细胞质收缩越厉害,[16,17]泡的卵母细胞,核仁由颗粒性染色质丝的不规则缠绕导致卵母细胞质量越差。Xia,Ebner等在研究中[2]而逐渐形成网状结构,其间有许多空泡。羊卵泡直将卵母细胞分级。I级:卵周隙正常,第一极体完整,形径为0.5～1.6mm时,核仁中出现很多电子致密度较低状规则圆或椭圆,表
8、面光滑;II级:卵周隙正常,第一极的纤维中心,此时的核仁由颗粒性染色质丝、空泡及纤体完整,圆或椭圆,表面粗糙;III级:卵周隙正常,第一维中心组成,rRNA和hnRNA合成十分的活跃(rRNA极体破碎;IV级:卵周隙过大,第一极体巨大型;V级:的合成场所在纤维中心,核仁空泡则可能与核仁物质卵周隙过大,第一极体破碎。所以,第一极体形态和卵[9]的运输和贮存有关);随后,空泡消失,核仁发生致密周隙大小与卵母细胞的受精率和胚胎质量相关密切。化。核仁的致密化伴随
