两种新型HBsAg基因的毕赤酵母表达载体构建及其表达

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1、第15卷第2期:14生物技术Vol15,No2:142005年4月BIOTECHNOLOGYApr2005后收集菌体并超声破碎,取上清10~15L上样电泳,考马斯亮genemutatedinhumanbrain,breastandprostatecancer[J].Science,1997,275蓝染色,结果见图2。由于NusA蛋白大小约66.4kD,而PTEN(5308):1943-1947.[2]SteckPA,PershouseMA,JasserSA,etal.Identificationo

2、facandidate蛋白大小约51.6kD,所以融合蛋白大小约为118kD,从图2可tumorsuppressorgene,MMAC1,atchromosome10q23.3thatismutatedinmul知,与空宿主组、空载体转化组相比,重组克隆组在预计大小tipleadvancedcancers[J].NatGenet,1997,15(4):356-362.(118kD)处出现一条明显的特异带,说明pET-Nus-PTEN重[3]LiDM,SunH.TEP1,encodedbyacandidatetumorsuppressorlocus,isa组载体在大肠杆菌BL

3、21(DE3)中成功地表达了真核抑癌基因novelproteintyrosinephosphataseregulatedbytransforminggrowthfactorbataPTEN的融合蛋白,表达的蛋白为可溶性的,经UVIBand软件分[J].CancerRes,1997,57(11):2124-2129.析表明,目的蛋白占菌体可溶性总蛋白的17%左右。[4]MyersMP,StolarovJP,EngC,etal.PTEN,thetumorsuppressorfromhumanchromosome10q23,isadual-specificityphosphata

4、se[J].ProcNatlAcad3讨论SciUSA,1997,94(17):9052-9057.PTEN基因是与人类十几种肿瘤的恶性增殖和转移有关[5]DuerrEM,RollbrockerB,HayashiY,etal.PTENmutationsingliomasand的抑癌基因,定位于人染色体10q23,具有9个外显子,其序列glioneuronaltumors[J].Oncogene,1998,16(17):2259-2264.内含有1212个核苷酸组成的开放阅读框,编码403个氨基[6]MarshDJ,CoulonV,LunettaKL,etal.Mutatio

5、nspectrumandgenotype-[1-3]phenotypeanalysesinCowdendiseaseandBannayan-Zonanasyndrome,two酸。对于第一个克隆到的具有双重特异性磷酸酶活性的hamartomasyndromeswithgermlinePTENmutation[J].HumMolGenet,抑癌基因PTEN,国际上对其抑癌机理的研究已经成为热点,1998,7(3):507-515.但国内对于该基因及其蛋白的研究仅集中在癌组织中PTEN[7]MeahamaT,DixonJE.Thetumorsuppressor,PTEN/MMAC

6、1,dephosphory蛋白的表达情况、PTEN基因突变的检测和PTEN基因真核载latesthelipidsecondmessenger,phosohatidylinositol3,4,5-trisphosphate[J].体的抑癌效果方面[13-17]。尽管大量研究表明带有PTEN基因JBiolChem,1998,273(22):13375-13378.的真核载体转染癌细胞系后对细胞的生长有抑制作用,但目[8]PersadS,AttwellS,GrayV,etal.Inhibitionofintegrin-linkedkinase(ILK)suppressesacti

7、vationofproteinkinaseB/Aktandinducescellcyclearrest前基因治疗的安全性、有效性和稳定性使其研究和临床应用andapoptosisofPTEN-mutantprostatecancercells[J].ProcNatlAcadSci受到很大限制,而纯化的蛋白质药物的应用越来越广泛。USA,2000,97(7):3207-3212.为了深入研究PTEN蛋白的作用机理及抑癌效果,并为[9]IijimaM,HuangYE,LuoHR.Novelmechanism

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