虎纹蛙骨髓细胞的染色体核型分析

《虎纹蛙骨髓细胞的染色体核型分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、虎纹蛙骨髓细胞染色体核型分析***（作者姓名）（中山大学生命科学学院10级生科1班广州510275）摘要：虎纹蛙在中国南方分布广，可人工养殖，是常用的动物实验材料。骨髓细胞分裂旺盛，用秋水仙素处理后，可用于染色体标本的制备，也是染色体核型分析的良好材料。染色体核型分析是物种遗传学研究的常用方法，因此掌握染色体标本的制备和核型分析方法有重要的意义。通过对虎纹蛙骨髓细胞染色体标本的制备和核型分析可知，虎纹蛙的染色体数为2n=26,核型为16m+10sm。最后，还对虎纹蛙骨髓细胞染色体标本制备的关键因素进行了探讨。关键词：虎纹蛙；骨髓细胞；核型；组型[2,4,

2、5]虎纹蛙是隶属于两栖纲无尾目蛙科蛙属的动物，是中国南方最常见的两栖动物。虎纹蛙在90年代已经实现人工养殖，是动物学实验教学和研究的常用材料。[1,4]在高等学校细胞生物学或遗传学实验课中，虎纹蛙骨髓细胞具有染色体大，染色体数目少（2n=26）等独特优点，是动物染色体标本制备和染色体核型分析的常用实验材料之一。[1,4,5]骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力，毋须经体外培养或添加植物血球凝集素（PHA）的刺激，即可直接观察到分裂细胞。在活体动物腹腔注射一定剂量的秋水仙素，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出

3、理想的染色体标本，是体细胞染色体核型分析的好材料。[1]核型（karyotype）是指一个细胞内的整套染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像，一般是将显微摄影得到的染色体照片剪贴而成。常用的手段还包括显微镜观察和拍照，图片处理软件进行排序和配对，以及数据处理软件进行分析等。而组型（idiogram）是通过对许多细胞染色体的测量取其平均值绘制而成的模式图，是理想的、模式化的染色体组成。两者的区别在于：正常细胞的核型能代表个体的核型；而组型代表一个物种染色体组型的特征。[1,3,4,5]核型的研究对人类医学遗传研究及临床应用，对探讨动植物起源、物种间亲缘关

4、系、鉴定远缘杂种等方面都有重大意义。1材料与方法1.1材料虎纹蛙成体，体重36.51g；1.2试剂1.2.1Carnoy固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）；1.2.20.1%秋水仙素溶液：称取10mg秋水仙素，加入10ml0.65%生理盐水（1ml含有1000μg,0.1ml含有100μg秋水仙素）；1.2.30.65%生理盐水1.2.41/15mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）；1.2.5Giemasa染液；1.3器材天平、离心机、温箱、显微镜、注射器、解剖盘、解剖剪、刀片、试管架、10ml离心管、吸管、烧杯、量筒、酒精灯、冰冻载玻片、玻璃板、吸水纸、擦镜

5、纸。1.4方法1.4.1青蛙骨髓细胞染色体标本的制备1.4.1.1秋水仙素处理：实验前4h，体重为36.51g的青蛙，腹腔注射100ug秋水仙素；1.4.1.2取股骨：毁髓法处死青蛙后，立即取出股骨，用刀片剃掉肌肉；1.4.1.3收集骨髓细胞：用刀片切开股骨的两端，用盛有生理盐水的注射器插入股骨的上端，冲出骨髓细胞至离心管中，直至股骨变为白色为止。将收集的骨髓细胞平衡后放入离心机，以1000r/min离心10min；1.4.1.4低渗处理：弃上清液，加入6ml蒸馏水，用吸管轻轻吹打成细胞悬浮液，置于26℃温箱中低渗20min；1.4.1.5预固定：加入5

6、滴新配的固定液，立即打匀，并以1000r/min离心10min后，弃上清液；1.4.1.6固定：沿管壁慢慢加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，室温下固定20min。1000r/min离心10min后弃上清液；1.4.1.7重复步骤（6）；1.4.1.8沉淀物中加入0.5ml固定液，用吸管吹打成细胞悬液；1.4.1.9滴片：用镊子取预先冰冻的干净载玻片，迅速从高处3滴细胞悬浮液，立即用嘴向同一方向吹起，使细胞分散均匀，然后置于酒精灯上微微加热干燥；1.4.1.10染色：将晾干的玻片放在洁净的玻板上，用Giemsa染液染色30min，再用自来水冲洗，

7、空气干燥；1.4.1.11镜检：在低倍镜下找到中期分裂相的细胞，转用高倍镜，选择染色体分散适度、长度适中的分裂相进行观察。1.4.2青蛙骨髓细胞染色体的核型分析染色体的基本形态学特征一般通过相对长度、臂指数、着丝粒指数三个参数进行描述。相对长度（relativelength）：指单个染色体长度与包括X（或Y）染色体在内的单倍染色体总长之比，以百分率表示。每个染色体的长度相对长度=×100%单倍染色体+X染色体总长度臂指数（amindex）：指长臂与短臂的比率，即臂指数＝长臂的长度/短臂的长度。长臂长度臂指数=短臂长度着丝粒指数（centromereind

8、ex）指短臂占该染色体长度的比率。短臂长度着丝粒指数=×100%该染色体总长按L