98·中国荷斯坦种公牛亲子鉴定及个体识别信息库的建立

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1、·2011·16·科技科学研究·1·中国荷斯坦种公牛亲子鉴定及个体识别信息库的建立112311杨超，张毅，石万海，陈绍祜，张胜利，张沅（1.中国农业大学动物科技学院，北京100193；2.北京奶牛中心，北京100192；3.中国奶业协会奶牛数据中心，北京100192）中图分类号：S823.2文献标识码：A文章编号：1004－4264（2011）16－0001－04摘要：为了构建基于微卫星标记的中国荷斯坦种公牛亲子鉴定及个体识别技术平台，本研究选取国际动物遗传学会（ISAG）推荐的12个微卫星标记（BM1824，BM2113，SPS115，ETH10，TG

2、LA122，ETH225，INRA023，TGLA126，TGLA227，BM1818，ETH003和TGLA53），采用荧光标记毛细管电泳方法，对571头荷斯坦种公牛进行基因型检测。统计结果显示，标记的平均多态信息含量为0.700，平均杂合度为0.735，属于高多态性标记；12个标-13记的累积排除概率大于0.996，累积一致性概率为4.9×10，将其运用于亲子鉴定和个体识别具有很强的检测效率。此外，通过分析每个标记的检测信号峰图特征，将检测结果与商业化试剂盒进行比较以及利用ISAG参考DNA样品进行等位基因统一命名等手段，建立了标准化的微卫星等位基因

3、分型方法，并初步建立起中国荷斯坦种公牛遗传检测信息库。关键词：遗传标记；种公牛；亲子鉴定；排除概率；一致性概率在奶业发达国家，基于分子标记的亲缘关系鉴鉴定效率。定作为一项分子育种技术，在奶牛群体遗传改良中近年来国内学者也开展了奶牛亲缘关系鉴定[1~3]发挥重要作用。亲子鉴定和个体识别是两类最常见的研究，但这些研究主要集中于分子检测技术的的亲缘关系鉴定。前者常用于种公牛系谱确认以及探索和应用，至今我国还没有一个统一的种公牛遗后测公牛与其女儿的父女关系鉴定，从而确保系谱传检测信息库。由于检测技术以及微卫星等位基因准确性，提高育种效率。后者则多应用于个体追溯分

4、型方法还没有实现标准化，这给亲缘关系鉴定技以及种公牛冻精的质检，例如意大利法律规定，种公术在我国的广泛应用带来了诸多的不便。本研究选牛每一批次的冷冻精液都需要进行DNA分析，检测择国际动物遗传学会（ISAG）推荐的12个微卫星标[4]与其血液样品的遗传一致性，从而避免冻精个体编记，对我国荷斯坦种公牛进行基因型检测，分析这号信息错误。些微卫星标记在种公牛中的多态性和亲子鉴定及根据亲缘关系鉴定的原理，无论亲子鉴定还是个体识别效率，以期建立一个中国荷斯坦种公牛遗个体识别，都需要同时检测多个遗传标记，并事先传检测信息库。建立特定群体的基因型信息库，获得这些标记的

5、基1材料与方法因型频率和基因频率等基本参数，从而科学地评估1.1试验样品571头种公牛冻精样品来自北京奶牛中心、山收稿日期：2011－04－28东奥克斯生物技术有限公司、天津市奶牛发展中心、基金项目：国家科技支撑计划（2006BAD04A01）（2011BAD28B02），948项目（2010-C14），行业科研专项（nyhyzx07-036-13），国家奶上海奶牛育种中心有限公司、新疆天山畜牧昌吉生牛产业技术体系，北京市科技计划（D08060500070801）。作者简介：杨超（1987-），男，山西人，硕士研究生，研究方向为动物物工程有限责任公司、宁

6、夏回族自治区家畜繁育中遗传育种。心、青海省种畜冷冻精液站、辽宁省种牛繁育中心、通讯作者：张沅（1943-），男，北京人，教授，博士生导师，研究方向为动物遗传育种。山西省家畜冷冻精液中心、新疆维吾尔族自治区畜·2·科学研究·2011·16·科技禽繁育改良总站、黑龙江省家畜繁育指导站、河北1.2.1微卫星标记省畜牧良种工作站和内蒙古家畜改良工作站。采用选取国际动物遗传学会（ISAG）推荐的12个微[5]高盐法对DNA进行提取。卫星标记，选择3种荧光素，即HEX（绿色）、VIC（黑1.2微卫星标记选择及基因型检测色）和FAM（蓝色），对上游引物进行荧光修饰（表

7、1）。表1标记名称与基本信息标记名称染色体位置引物序列（5′→3′）正向/反向荧光素片段长度范围（bp）退火温度（℃）BM1818chr23AGCTGGGAATATAACCAAAGGFAM253~27258AGTGCTTTCAAGGTCCATGCBM1824chr1GAGCAAGGTGTTTTTCCAATCHEX178~19258CATTCTCCAACTGCTTCCTTGBM2113chr2GCTGCCTTCTACCAAATACCCFAM123~14358CTTCCTGAGAGAAGCAACACCTGLA53chr16GCTTTCAGAAATAGTTTG

8、CATTCAFAM152~18658ATCTTCACATGATATTACAGCA