枯草芽孢杆菌扩培工艺

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1、养殖与饲料２０１１年第１２期试验研究·４１·枯草芽孢杆菌扩培工艺崔腊梅１１１２２２任翠娟张凯易卿赵洁成珍１．河南省农业微生物工程技术研究中心，河南三门峡４７２１４３；２．三门峡龙飞生物工程有限公司，河南三门峡４７２１４３摘要本研究课题是从实际生产出发，以一株枯草芽孢杆菌为研究对象，通过对培养基碳源、氮源等的选择及配比的正交试验，确定出最适合枯草芽孢杆菌产芽孢的培养基，再通过对吸附载体配比的正交试验，确定出最佳枯草芽孢杆菌液体吸附载体，为发酵生产过程中枯草芽孢杆菌生产工艺提供参数。结果发现，枯草芽孢杆菌扩培工艺最佳条件为：最佳发酵培养基葡萄糖０．５％＋淀

2、粉１．０％＋黄豆粕３．０％＋硫酸锰０．２‰＋磷酸氢二钾０．３‰＋硫酸镁０．２‰＋碳酸钙０．７％＋硫酸铵０．１％；最佳吸附载体配比麸皮２５．０ｇ＋沙子２０．０ｇ＋碳酸钙４５．０ｇ。试验表明，当培养基配方为葡萄糖０．５％、淀粉１．０％、黄豆粕３．０％、硫酸锰０．２‰、磷酸氢二钾０．３‰、硫酸镁０．２‰、碳酸钙０．７％、硫酸铵０．１％，优化的培养基条件能有效促进枯草芽孢杆菌生长，并能促进枯草芽孢杆菌芽孢的生成。关键词枯草芽孢杆菌；扩培工艺；吸附载体；培养基；正交试验；发酵培养；益生菌剂枯草芽孢杆菌菌剂是一种无毒副作用、无残留主要试剂：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，

3、淀粉，硫酸的益生菌剂，其中所含的活菌以孢子形式存在，耐锰，玉米粉，等。酸、耐盐、耐高温，具有抗逆性，在很多领域已经应主要设备：隔水式电热恒温培养箱，ＨＺＱ－Ｑ振用。枯草芽孢杆菌在饲料中应用比较广泛，而且在荡器，立式压力蒸汽灭菌锅。污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当１．２菌株的筛选广泛，是一种多功能的微生物。具体应用有３方面：从购买及实验室保存的枯草芽孢杆菌斜面，挑一是市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化去少许菌落划线于促芽孢形成培养基（牛肉膏５ｇ、槽、化粪池等处理，畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪蛋白胨１０ｇ、氯化钠５ｇ、琼脂２０ｇ、蒸馏水

4、１０００便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理。二是畜牧、家ｍＬ）平皿上，３７℃培养２０ｈ左右取出。选择大菌畜、特种动物及宠物养殖，水产养殖。三是可以与多落挑到装有５ｍＬ无菌水的试管中，震荡均匀后，置种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。本研究１００℃水浴中加热１５ｍｉｎ，再涂布于促芽孢形成培课题是以一株枯草芽孢杆菌为研究对象，通过正交养基的平皿上培养，反复多次。最后选取平皿上的试验确定其最佳发酵培养基和最佳液体吸附载体，大菌落，转接到促芽孢培养基的试管斜面上，３７℃为发酵生产过程中枯草芽孢杆菌生产工艺提供培养２０ｈ左右拿出放入４℃冰箱保存备用。参数。１．

5、３发酵培养基优化通过对培养基碳源、氮源等的选择及配比的正１材料与方法交试验，确定出最适合枯草芽孢杆菌产芽孢的培１．１菌种、试剂及设备养基。菌种：枯草芽孢杆菌由三门峡龙飞生物工程有１）首先选择４种不同培养基进行摇瓶培养，观限公司保存。察比较活菌数和芽孢形成情况。收稿日期：２０１１－１１－０１崔腊梅，女，１９８３年生，大专。·４２·试验研究养殖与饲料２０１１年第１２期２）培养基的配制：①号培养基为淀粉０．５％＋１．５吸附载体的筛选玉米粉１．３％＋黄豆粕２．０％＋葡萄糖０．５％＋碳首先选择４种不同载体配比进行吸附试验比酸钙０．７％＋硫酸铵０．１％＋磷酸氢二钾

6、０．３‰＋较，４种载体配比后，置高压蒸汽锅中１２１℃灭菌硫酸镁０．２‰；②号培养基为淀粉０．５％＋玉米粉１ｈ，全部按照最终１０亿／ｇ含菌量进行吸附，然后按照最终观察活菌数情况，进行正交试验，得出最佳１．３％＋黄豆粕２．０％＋葡萄糖０．５％＋碳酸钙吸附载体。０．７％＋硫酸铵０．１％＋磷酸氢二钾０．３‰＋硫酸镁０．２‰＋硫酸锰０．２‰＋淀粉０．３％；③号培养基为２结果与分析牛肉膏０．３％＋蛋白胨１．０％＋葡萄糖１．０％＋氯２．１菌株筛选前后对比化钠０．５％；④号培养基为牛肉膏０．３％＋蛋白胨筛选前后种子作对比：从冰箱中拿出筛选前、后１．０％＋葡萄糖１．０％

7、＋氯化钠０．５％＋硫酸锰的种子斜面各１支，分别接入１环装有肉汤培养基０．２‰＋淀粉０．３％。的三角瓶中，在３７℃、每分钟２００转的摇床上震动以上４种培养基ｐＨ均为７．０～７．２，且每种培培养，每１２ｈ涂片观察１次，培养３６ｈ，记录活菌数养基各做３瓶，装液量１００ｍＬ／５００ｍＬ三角瓶，置和芽孢率，此过程重复３次，结果如图１所示。立式压力蒸汽消毒器中，于１２１℃灭菌３０ｍｉｎ，取出备用。３）摇瓶种子液制备：将保存的应用菌种在无菌室内接入肉汤培养基中，在３７℃、２００转／ｍｉｎ的摇床上震荡培养１２ｈ。４）接种和培养：培养好的种子液以１０％接种量，分别接入４

8、种不同培养基中，３７℃振荡培养，每隔１２ｈ检测１次，３６ｈ结束培养，此过程重复３次。５）正交试