注射用重组人干扰素α1b

注射用重组人干扰素α1b

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1、注射用重组人干扰素α1bZhusheyongChongzuRenGanraosuα1bRecombinantHumanInterferonα1bforInjection本品系由高效表达人干扰素α1b基因的大肠杆菌,经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂,不含防腐剂和抗生素。1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2制造2.1工程菌菌种2.1.1名称及来源重组人干扰素α1b工程菌株系由带有人干扰素α1b基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。2.1.2种子批的建立应符合

2、“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。2.1.3菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。2.1.3.1划种LB琼脂平板应呈典型大肠杆菌集落形态,无其他杂菌生长。2.1.3.2染色镜检应为典型的革兰阴性杆菌。2.1.3.3对抗生素的抗性应与原始菌种相符。2.1.3.4电镜检查(工作种子批可免做)应为典型大肠杆菌形态,无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。2.1.3.5生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。2.1.3.6干扰素表达量在摇床中培养,应不低于原始菌种的表达量。2.1.3.7表达的干扰

3、素型别应用抗α1b型干扰素参考血清做中和试验,证明型别无误。2.1.3.8质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。2.1.3.9目的基因核苷酸序列检查(工作种子批可免做)目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。2.2原液2.2.1种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养,供发酵罐接种用。2.2.2发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。2.2.3种子液接种及发酵培养2.2.3.1在灭菌培养基中接种适量种子液。2.2.3.2在适宜的温度下进行发酵,应根据经批准的发酵工艺

4、进行,并确定相应的发酵条件,如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查(附录ⅨG)。2.2.4发酵液处理用适宜的方法收集处理菌体。2.2.5初步纯化采用经批准的纯化工艺进行初步纯化,使其纯度达到规定的要求。2.2.6高度纯化经初步纯化后,采用经批准的工艺进行高度纯化,使其达到3.1项要求,即为干扰素原液。加入适宜稳定剂,除菌过滤后于适宜温度下保存,并规定其有效期。2.2.7原液检定按3.1项进行。2.3半成品2.3.1配制与除菌2.3.1.1稀释液配制按经批准的配方配制稀释液。配制后

5、应立即用于稀释。2.3.1.2稀释与除菌将检定合格加稳定剂的干扰素原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品,保存于2~8℃。2.3.2半成品检定按3.2项进行。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。2.4.3规格应为经批准的规格。2.4.4包装应符合“生物制品包装规程”规定。3检定3.1原液检定3.1.1生物学活性依法测定(附录ⅩC)。3.1.2蛋白质含量依法测定(附录ⅥB第二法)。3.1.3比活性为生物学活性与

6、蛋白质含量之比,每1mg蛋白质应不低于1.0×107IU。3.1.4纯度3.1.4.1电泳法依法测定(附录ⅣC)。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离胶胶浓度为15%,加样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或5μg(银染法)。经扫描仪扫描,纯度应不低于95.0%。3.1.4.2高效液相色谱法依法测定(附录ⅢB)。色谱柱以适合分离分子质量为5~60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂;流动相为0.1mol/L磷酸盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液,pH7.0;上样量不低于20μg,于波长280nm处检

7、测,以干扰素色谱峰计算理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算,干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。3.1.5分子量依法测定(附录ⅣC)。用还原型SDS-丙烯酰胺凝胶电泳法,分离胶胶浓度为15%,加样量应不低于1.0μg,制品的分子质量应为19.4kD±1.94kD。3.1.6外源性DNA残留量每1支次人用剂量应不高于10ng(附录ⅨB)。3.1.7鼠IgG残留量如采用单克隆抗体亲和色谱法纯化,应进行本项检定。每1支次人用剂量鼠IgG残留量应不高于100ng(附录ⅨL)。3.1.8宿主菌蛋白残留量应不

8、高于总蛋白质的0.10%(附录ⅨC)。3.1.9残余抗生素活性依法测定(附录ⅨA),不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。3.1.10细菌内毒素检查每30万IU应小于10EU(附录ⅫE凝胶限量试验)。3.1.11等电点主区带应为4.0~6.5,供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致。(附录ⅣD)。3.1.12紫外光谱扫描用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100μg/ml~500μg/m

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