超声波细胞粉碎机

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1、基本原理    超声波细胞粉碎机是利用超声波在液体中的分散效应，使液体产生空化的作用，从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。超声波细胞粉碎机由超声波发生器和换能器二大部分组成。超声波发生器将市电转变成18-21KHz交变电能供给换能器。锆钛酸钡压电振子是换能器的心脏，它随交变电压以18-21KHz频率作伸缩弹性形变，换能器随之作纵向机械振动。振动波通过浸入在生物溶液中的钛合金变幅杆产生空化效应，激发介质里的生物微粒剧烈振动。主要用途     超声波粉碎机能用于粉碎动物细胞、植物细胞、细菌、牙孢或组织。分散稀土和各类无机矿物粉。     超声波粉碎机是加速化学、生

2、物学、物理学的反应速度和加速液体脱气的理想装置。     超声波粉碎机能配制近乎微米的百分之一大小的乳胶体；匀化“难混溶”的混合液；聚合一些物质，析出另一些物质。    总之，超声波粉碎机能实现提取、粉碎、乳化、匀化、悬浮液、变异、气悬体、加速脱溶、晶化及在电子显微镜下配制各种生物样本之多种功能超声波破碎细胞的常见问题   大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。   细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5

3、ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min就可以。   在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响 了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。 1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功 率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太

4、剧烈就好。 2*破3S停10S，破个二三十次看看。3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时 试着加大体积,强度最好不要超过60%. 4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一 些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？ 前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声破碎时采用的具体条件是：(1)取细菌的24h培养液于5000r／min下离心5min收集菌体． (2)用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液

5、洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40 mL大塑料试管内． (3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200W，1／2”探头，破碎30s，间歇30S)． (4)破碎液于12000r／min下高速冷冻离心30min，收集细胞碎片和上清夜．    超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就 可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终 浓度1mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。   

6、 放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌 （Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学 组分变化很大。   在做大肠杆菌超声时，采用的是400W，超5停5的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，似乎没什么效 果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢，因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。   再有镜检是检验破碎效果,但是细胞破碎程度和我需要的酶获得之间有正比关系吗？破碎时间长也会影响到 酶的活性。所以想问问anaisai战友，你提供的“功率200W，1／2”探头，破碎

7、30s，间歇30S”的条 件好像是用于破碎链霉菌孢子的，也可以用于发酵离心后的菌泥吗？如果可以，你破碎的全程时间大概是多 少呢？    如果你需要的是胞内酶，细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到 酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断，最直接的办法是先绘制相关曲线（酶活性和 时间的关系曲线）。   实验中，破碎的是棒状杆菌（也是很难破壁的G+菌），破碎时间控制在30min左右，酶活较好。 如果是基质菌丝的话,好可以考虑用溶菌酶处理一下.一般来讲这几种方法读可以的: 一,液氮研磨 二,用frenchpress破碎 

8、三，超声波破碎四，溶菌酶