GB15193.10-2003 非程序性DNA合成试验.pdf

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1、ICS07100C53中华人民.浏户、、国国家标准GB15193.10-2003代替GB15193.10-1994非程序性DNA合成试验UnscheduledDNAsynthesistest2003-09-24发布2004-05-01实施中华人民共和国卫生部*，中国国家标准化管理委员会‘’卜GB15193.10-2003月U吕本标准全文强制。本标准代替GB15193.10-1994《非程序性DNA合成试验》本标准与GB15193.10-1994相比主要修改如下:—在“范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生

2、物和物理因素，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;—在“试剂”中，增加了“参考阳性对照物”;7,12一二甲基苯并蕙(7,12-dimethylbenzathracene),2乙酞氨基药(2-acetylaminofluorene),4-硝基哇琳氧化物(4-nitroquinolineoxide),N一甲基亚硝胺(N-dimethylnitrosamine);—在“UDS的液体闪烁计数显示法”中:增加“每组(包括对照组)至少做6个培养瓶。

3、”—在“UDS的放射自显影显示法”中，增加了“应同时设有阳性对照组和阴性对照组，包括加S-9和不加S-9两种情况，’;增加了“结果判定”内容。自本标准实施之日起，GB15193.10-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:浙江医科大学本标准主要起草人:徐应年、丁辰。本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GB15193.10-2003非程序性DNA合成试验范围本标准规定了非程序性DNA合成试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的诱变性和/或致癌性，

4、检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。用这种短期筛选方法可以检测出一些短期体外试验法所不能检出的诱变剂和/或致癌剂2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1非程序性DNA合成unscheduledDNAsynthesis,UDS当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在S期以外的其他细胞周期，称非程序性DNA合成。3原理正常情况下，于细胞有丝分裂周期中，仅S期是DNA合成期。当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在其他细胞周期，

5、称程序外DNA合成，即UDS，因此发现UDS增高，即表明DNA发生过损伤在体外培养细胞中，用UDS的测量来显示DNA修复合成的主要关键在于如何鉴别很高水平的半保留DNA复制和水平较低(充其量只有半保留DNA复制的5%)的UDS。这可以用同步培养将细胞阻断于G1期并用药物(常用经基脉)抑制残留的半保留DNA复制后显示。同步培养可用缺乏必需氨基酸精氨酸的培养基〔ADM)使DNA合成的始动受阻而使细胞同步于G1期在这些半保留DNA合成明显抑制和阻断了的细胞中，UDS即可用3H-胸腺嗜吮核昔的掺人增加显示。它可用放射自显影或液体闪烁计数法进行测量。4试荆与器材4.1试剂全部试剂除

6、注明外，均为分析纯，试验用水为双蒸水。4.1.1参考阳性物对照物:可用7,12一二甲基苯并蕙(7,12-dimethylbenzathracene),2一乙酞氨基药(2-acetylaminofluorene),4-硝基哇琳氧化物(4-nitroquinolineoxide),N一甲基亚硝胺(N-dimethylnitrosamine)4.1.2细胞增殖用培养基:Eagle氏最低要求培养基(MinimalEssentialMedium，简称EMEM)85份，小牛血清15份，加人青霉素、链霉素贮存液1份，使青霉素、链霉素的最终浓度分别为100单位及100erg/mL,EME

7、M培养基可选用各种商品供应之粉末培养基按生产厂商提供资料配制并除菌。40C冰箱贮存。4.1.3同步用培养基:不含精氨酸之Eagle氏MEM培养基(ADM)98份，小牛血清2份，青霉素、链霉素浓度同细胞增殖用培养基。71GB15193.10-20034.1.4Hanks平衡盐溶液(HBSS)贮液A:将氯化钠160g,氯化钾8g，硫酸镁(MgSO,·7H,0)2g及氯化镁(M9Cl2·6H20)2g溶于800ml双蒸水(500C-600C)中。另取无水氯化钙2.8g溶于100mL双蒸水中。将上述两溶液混合后，加水至1000ml，加