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《植物内源激素的提取分离和生物鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、1979年9月植物生理学通讯第2期__,,,,,,气二,,,竺竺二几二舀二:互遭屯笔二二二二二二二二巴二巴二二二二二二竺二职竺套二二万竺笠,竺试二孟二畔兴份伶材材材朴矜朴朴代,轰技术和方法}琢布守衫箫衬神孙孙衬神苦乒植物内源激素的提取分离和生物鉴定丁静沈镇德方亦雄马秀香李琳倪晋山中国科学院上海位物生理研究所)、植株、,自种子萌发生长发育直到衰单用气液层析等测得某激素的特定峰时也,以及部,老分器官的脱落等等这些极有规常有必要再用生物鉴定法来确定它是否具有。,,是受因此律的生命活动植物体内存在的极为微生理活性生物鉴定法仍然是研究内,。量的内源激素所调节的这一
2、点已是大家公源激素的一种重要手段。认的了内源激素在调节植物生长发育过程在研究各类激素含量水平的变化及其相,必然有它。互作用时,利用同一样品,从其中分离鉴定中自己的消长规律和代谢途径在研究激素,,,12作用时常需要探明激素的分布四类激素显然比用各别样品分别测~。。,或其量的消长植物体内的激素含量是极低种激素更为合适当然这样的提取分离方,。ar的这就需要将植物体内极为微量的内源激法是要烦复一些Mtin等À曾定期取用素提取分离出来,并且用专一和准确的方层积胡桃的核仁,企图从同一样品中同时提,。,法作定性和定量的测定关于内源激素的取鉴定四类激素他们发现其中仅有I
3、AA,e。分离提取和生物鉴定自Wnt于1928年建和ABA近年Shindy等O用8天日龄棉铃,,,,立燕麦芽鞘弯曲法¹半个世纪以来已有的胚珠为材料在有机溶剂提取分离后未,,进展甚,不少探索特别是近廿年来为迅经过其它纯化步骤即用气液层析连同质谱速,,,已经研究了不少种类植物材料从其中仪自动记录从同一样品中测得了四类内源分别分。。离鉴定到1种或2种激素有关内源激素激素的生物鉴定方法的报导是很多的,对这为了探讨棉花幼铃发育过程中内源激素。些方法的优缺点也有评论近年应用气液层,研含量水平的变化究内源激素水平与幼铃,,或用高,析特别是气液层折与质谱仪连用发育和脱落
4、的关系及内源激素对幼铃发育,,,压液相层析已能较简便而精确地测到极为的调节作用近年我们探索了一套可以从微量的、、、四类激素〔叫噪乙酸(IAA)脱落一个样品中提取分离纯化和鉴定四类内、。酸(ABA)赤霉素(GA)和细胞分裂素源激素的流程应用这个方法,进行了棉花,(CTK)〕并且同类激素中结构略有不幼铃发育过程中内源激素水平的变化和赤霉,。同的成员例如细胞分裂素和赤霉素中各个酸对它的影响的研究我们的方法主要是选,用有机溶剂提取分离,继而经离子交换柱不同成员都能分别鉴定这就增进了人们对。,oex,植物激素的了解当然用这类仪器测定内(DEAE纤维素柱和Dw50柱
5、)纯化源激、,素的方法简便准确而灵敏度高能测再应用薄板层析达到进一步分离纯化的目出生,,物鉴定所不能测出的微量成分甚至能的最后用生物鉴定法分别鉴定各类激素的,。分辨出同类激素中不同成员在今后研究工含量现将提取分离和生物鉴定方法介绍于,。,。作中必然会迅速发展和广泛应用但是下这,类设备不是一般实验室都能装备的而且、(一)植物激素的提取将水相〔B〕中遗留的乙酸乙醋蒸掉,pH2.,oex,过滤调至8上Dw50柱先用分离和纯化一120毫升重蒸馏水洗,洗出的水弃去,后用,1.采样及样30毫升3N氨水洗脱洗脱液减压浓缩至约品贮存。,10毫升此时其中所含的氨已蒸去调P
6、H,尽快在规定的时间采取一定量的样品8.0,1:l),地计算其数目,称重,’封入聚乙烯薄膜袋,至用水饱和正丁醇(萃取三次,加70℃减压蒸去正丁醇95%已醇2毫升洛投入盛有固体二,氧化碳的广口保温瓶中在。,此:,,解贮于冰箱乙醇液称为〔B〕其中一79℃快速冰冻然后放置在一20℃低温冰。,。含有经过初步纯化的CTK箱保存作为提取内源激素之用DEAE纤维素柱的制备DEAE纤维2.有机溶剂和离子吸附柱提取分离素粉—,是弱碱性阴离子交换剂常用于纯化植样品加在,。,O℃以下冷却的甲醇在组织物激素½取DEAE纤维素粉先浸于重蒸馏,,。捣碎器中捣碎倒入搅拌器使样品与甲醇
7、水中,并漂去细粒,在布氏漏斗中排除水分:,。之比为18置冰库中在4℃上下搅拌过夜移入烧杯中,加0.INHZSO‘浸,泡过夜再。用布氏漏斗过滤残渣(连同剪碎的滤纸)再,用童蒸馏水洗至放布氏漏斗中吸滤接近中:,。;.a,加8。%甲醇(15)搅拌数小时过滤再用性然后用0INNOH浸泡放在布氏漏斗:,。80%甲醇(14)抽提残渣过滤合并三次甲,醇滤液在薄膜旋转浓缩器中于40℃减压。阅浓缩至约原体积的一半加石油醚于浓缩液雌翩
8、,甲:,畴科1礴褚时中(提取浓与有机溶剂之比为l1下同)在分峨,,液漏斗中用力振摇待分层后将上层绿色石,,。油醚弃去下层为甲醉溶浪分相要求清
9、晰鼓,则甲醇液再川石油醚提如石油醚绿色甚深峥气啼碱取,以。去除其中部分的色索甲醇
