三角帆蚌十六种同工酶系统的表型及其在瘟病病蚌中的病理变化

《三角帆蚌十六种同工酶系统的表型及其在瘟病病蚌中的病理变化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、f～1第17卷第3期水产学报Vo1．17，No．81993年9月JOUBNAL0FFISHERIES0FCBINASep．．1993三角帆蚌十六种同工酶系统的表型及其在瘟病病蚌中的病理变化一邵健忠理——墨一华志华毛树坚、q／争，争f。／f一(tt州大学生物研究所，310028)扪提要采用聚丙烯酰胺凝驶电泳技术，对我国三角帆蚌(Hyr~oFs／s0t‘，，-“I脚．)11种蛆织中16种同工酶系统的酶谱表型、组织分布、活性含量和迁移特征进行了分析，井就不同酶谱特征与基因表达状况作了讨论。证实醑酶和砖酸甘油脱氢酶的表型和活性含量在病蚌体

2、内有明显的紊乱现象，表明三角帆蚌瘟病的病理机制与消化系统脂类代谢异常有密切关系．消化系统两种酶谱的特异性变化，可作为瘟病早期诊断的生化辅助褶括。关键词三，三壁墨，蚌病病理，蚌病诊断，趣．三角帆蚌(且酊smLea)是我国培育淡水珍珠的优良品种，以往对它的研究主要见诸生态、养殖和组织形态学等，生理生化和分子生物学的工作较步[石安静，1985，石安静等，1987~剂小明，19913，同工酶系统的研究则尚未见报道。70年代末，随着生产上传染性三角帆蚌瘟病的大规模流行，国内开始有关病原学研究[倪达书等，19823，1986年确认三角帆蚌瘟病

3、是一种病毒性蚌病[张治国等，19863

4、1987年对病原病毒进行了分离和鉴别，认为是嵌砂样病毒科(AtenVirjdBe)病毒，暂名为三角帆蚌瘟病病毒(Hb,r4op~s竹

5、描Pla~eViras，HoPV)[张治国等，19873。为了深入探讨三角帆蚌瘟病的病理机制及开展临床诊断和防治，同时也为贝类学基础研究积累资料，本文报道瘟病前后三角帆蚌成体组织中16种同工薛系统的表型及病理变化。一、材料和方法1．实验蚌=龄三角帆蚌200余只，蚌体长10—12厘米，取自浙扛省德清珍珠研究所蚌养殖基地，实验前置250水族箱人工饲养3—4周，确证

6、健康无病后使用。2．病毒来源HoPV取自浙江省德清疫点自然发病的瘟病病蚌组织，采用蔗糖密度梯度离心分离提纯[张治国等，1987~，Reed-Muench法测定其对蚌体的半数致死剂量LD-70。C保存备用。3．病蚌制备取分离提纯的HcPV，以1O0LD。(5．0LogLD；。／o．1m1)的量从斧足注射感染实验蚌，水温250，15天后发病死亡。实验将整个发病期分为早、中、后三个时期，每5天为一期，分别取材备用。4．同工酶样品的提取分别取健康蚌及各期病蚌的外套膜、鳃、生殖腺、肝、胃、肠、收稿日期：19∞——ol—l1．水产学报玎甚闭壳

7、肌、斧足、心脏、触唇和围心腔液¨种组织，加o05MTris一0．38MGly，pH8．3缓冲液匀浆，48，000g离心，收集上清层同工酶液，一70C保存。5．电泳方法采用高pH不连续系统聚丙烯酰胺凝胶平板电泳，参照Blackshear等方法进行EBlackshear，P．J．，1984J。电泳前按Bradford法测定各样品的蛋白浓度[Bradford，M．M．，1976J，以200微克／孔的量加样电泳。酶带的染色按Sicil~ano等方法进行【希西来诺等，t98％胡髓书等，19~5J。电泳图谱以区带数目、染色强度和相对迁移率为指

8、标进行描绘。岛津CS-930薄层色谱仪扫描，根据扫描峰面积值，比较酶带组份的相对活性含量。6．酶的命名对目前尚不清楚其分子遗传基础的同工酶带的命名，均按国际生化命名委员会的规则进行[苏学良等，1991]。二、结果(一)健康蚌组织中同工酶系统的分析1．乙醇脱氢酶(ADH，E．O．1．L1．1)三角帆蚌ADH的活性很低，11种组织的电泳结果，仅在闭壳肌中显示两条染色很浅的酶带ADH-1和ADH-2，其它组织均未检测到ADH的活性(图1，A)d2．口一磷酸甘油脱氢酶(~-GPDH，E．C．1．L1．8)未感染病毒的健康蚌中GPDH的活性

9、很低，只能在外套膜、生殖腺、肝、胃、肠和闭壳肌中检测到微弱的酶带，各组织的酶带数均为两条，=-GPDH-1和=-GPDH一2，=-GPDH—l的活性略高(图1，B)。3．乳酸脱氢酶(LDH，E．C．1．1．L27)三角帆蚌LDft的活性也很低，在外套膜、生殖腺、闭壳肌和斧足中各显示1条微弱的酶带，与草鱼的LDH-A~酶带相对应(图1，0)。4．苹果酸脱氢酶(MDH，E．C．1．L1．37)三角帆蚌MDH的活性较高，u种组织均有分布，包括趋于阴性一侧的线粒体型m-MDH和趋于阳极一侧的细胞质型g—MDH两组m-MDH的酶带数均为1条

10、；g-MDⅡ的酶带数在外套膜、鳃、生殖腺、闭壳肌中为1条，在肝、胃、肠、斧足、心脏、触唇和围心腔液中为3条；目一MDⅡ酶带中以g—MDⅡ一l的活性最高(图l，D)。5．苹果酸酶(ME，E．C．1．1．1．40)三角帆蚌中ME的活性很高，但酶谱单一，