线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理

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1、JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名称：JanusgreenB别名：健那绿；双氮嗪绿。苏铁木精英文别名:Janusgreen；Diazinegreen；DiazinegreenS。化学式：C30H31N6Cl定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成

2、为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。Cas编号: 2869-83-2EINECS编号: 220-695-6MDL编号: MFCD00011758Beilstein编号: 分子式: C30H31ClN6分子量: 511.06中文别名: 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基

3、)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物英文别名:　3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenaziniumchlorideDiazinGreenSUnionGreenBC.I.11050性状:　棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体染色剂.线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.用途:　用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化

4、还原指示剂和铜的电镀添加剂。贮存: 密封干燥保存。联合国编号: Risk: Safety: S24/25Hazard: 小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观察1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法

5、。这种染色方法常用的是化学染料。目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是

6、具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(JanusgreenB)和中性红(neutralred)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。（3）选择活体染料的原则：①性质：有电化学特性②低毒、无毒③低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹

7、纳斯绿B染液④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏。选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。（2）滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。以组织边缘被染成蓝绿色为准。（3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充分剪碎组织制成悬液。（4）静置上述悬液1~2

8、mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。5.实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。10*40显微镜下观察：6.分析与讨论（1）结果分析：部分肝细胞的线粒体被染成绿色（2）注意事项①取肝组织：取肝组织时，应注意选择肝的边缘部分，这一部分组织的厚度差比分剪