对比实验方案--伯豪

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1、对比实验方案一、研究背景根据国际和国内有关的慢性乙肝治疗特点，HBV基因耐药情况作为慢性乙肝治疗过程中一种重要指标，其检测结果在确定肝癌患病风险、评估乙肝病毒感染阶段以及监控治疗过程方面具有非常重要的作用，因此，选择一种高覆盖度、检测准确的HBV诊断试剂或检测方法对临床乙肝诊断和用药监控来说至关重要。从我国临床开展HBVDNA检测以来，该项检测就广泛的应用于乙肝治疗的过程中。但因为乙肝耐药检测试剂国内没有完善的被CFDA批准的解决方案，国内的乙肝治疗长期依据HBVDNA病毒载量的变化来指导治疗，用药方案的采用完全依赖医生经验，导致面对疑难病人时，医生不得不求助于第三

2、方检测机构提供的科研检测手段获取病人耐药情况。结果品质无从保证。上海伯豪医药科技有限公司是上海生物芯片有限公司/生物芯片（上海）国家工程中心下属子公司，公司主要从事基因测序技术的医学转化工作，秉承“传递人类健康价值”理念，基于美国生命技术公司（LifeTechnologies）3500Dx基因分析仪技术平台，开发了乙型肝炎（HBV）病毒耐药基因突变检测试剂盒产品。基因测序和基因片段分析作为分子诊断的一个技术平台,是分子诊断技术最精确的方法,可应用于临床遗传风险筛选和遗传疾病的诊断,提供给医生的信息对疾病诊断和治疗及健康状况的检测提供重要依据。同时，基于经典一代测序的

3、技术平台检测HBV耐药基因突变情况，比现阶段已被批准的其它检测平台的试剂盒，具有位点覆盖度高，检测结果附加值高，检测准确度高，假阴性率低等特点，因此试剂刚刚研发完成，这些特点是否具有优势值得进一步评价。二、研究目的以上海伯豪医药科技有限公司的“乙型肝炎病毒耐药基因检测试剂盒（PCR-测序法）”作为待考评试剂，选择立菲达安公司HBV病毒耐药基因检测试剂作为对照试剂，针对临床样本进行对比试验研究，通过试验数据的统计分析评价两种试剂的灵敏度、特异性、定量准确性。并比较其在临床上的应用价值。三、研究管理本次试验研究由教授担任负责人，临床试验前由各试验研究单位负责人协商、确定

4、试验方案以及试验过程质量控制方案、试验数据管理、统计分析方法等。各研究单位按照确定的试验方案进行试验研究。四、总体设计（一）标准血清盘/标准品检测研究用一支标准血清样品适当稀释至关键医疗决策浓度中，2000与20000两档（表1），检测伯豪医药试剂和立菲达安诊断试剂盒的灵敏度。表1在患者监控过程中使用HBVDNA病毒载量的治疗决策浓度用于确定患者治疗或者管理的关键医疗决策浓度关键医疗决策浓度AASLD(2009)、EASL（2009）、APASL（2008）、慢性乙肝防治指南、美国慢性乙肝感染处理（2008）治疗路线50IU欧洲肝病研究学会EASL2009指南，替比

5、夫定治疗慢性乙型肝炎中国路线图完全病毒学应答：＜60IU/ml；部分病毒学应答：60至＜2,000IU/ml200≥200IU/ml，HBeAg（-），代偿期肝硬化患者见EASL、APASL、AASLD指南2,000＞2,000；无肝硬化HBeAg（-），≥2,000IU/ml；代偿期肝硬化HBeAg(+)，≥2,000IU/ml部分病毒学应答：＞60到＜2,000IU/ml；病毒学不充分应答≥2,000IU/ml20,000＞20,000；HBeAg（+），≥20,000IU/ml；HBeAg(-)，≥20,000IU/ml见EASL、APASL、AASLD指南2

6、00,00010倍稀释，用于确定整个范围内的准确度10倍稀释，用于确定整个范围内的准确度基线IU/ml-在肝癌预测中非常重要基线IU/ml–2,000,000在治疗结果预测中非常重要具体设计：1、灵敏度参考品的制备：将PCR定量检测定值的高浓度HBV参考品（>2.00E+07IU/ml）稀释至2.00E+04IU/ml、2.00E+03IU/ml、2.00E+02IU/ml。2、对比测评方法1）灵敏度评价：用2.00E+02IU/ml、2.00E+03IU/ml、2.00E+04IU/ml样品评价两种试剂的检测下限即检测灵敏度，每个浓度重复检测3次。2）精密度/重复

7、性评价：用2.00E+07IU/ml、2.00E+05IU/ml、2.00E+03IU/ml三个浓度评价两种试剂的精密度/重复性，每个浓度重复检测5次以上。求检测的片段大小，突变点的重复出现次数。重复出现次数应为5次。片段大小应在500bp左右。3）结果比对选取50例临床样品，有确认突变的样品不少于30例，阴性样品不少于5例，剩余样品在HBV定量检测中呈阳性的样品中随机选择，用两种试剂进行检测，测序结果均用life公司推荐的软件分析六种核苷酸药物（阿德福韦酯、拉米夫定、替比夫定、恩替卡韦、替诺福韦酯、恩曲他滨）的耐药性情况，比对两种试剂的检测结果的一致性情况。（