猪圆环病毒病2型灭活疫苗(LG株)工艺规程

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1、编号:SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号:SC-TS-02-218生效日:1/16页标题:猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程起草 :起草日期 :部门审核 :审核日期 :QA审核 :审核日期 :批准 :批准日期 :分发部门 :质管部、技术研发部、生产部目录1.主题内容22.适用范围23.引用标准24.规程内容24.1品名24.2剂型24.3规格24.4菌（毒）种24.5批准文号24.6工艺流程图24.7质量控制点

2、44.8活性物质制备工艺过程44.9活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算74.10油乳剂灭活疫苗制造工艺过程74.11油乳剂剂制造技术经济指标94.12设备一览表104.13生物安全及劳动保护104.14物料114.15成品质量标准134.16贮藏和有效期144.17包装材料要求144.18标签、说明书15题目 :猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程编号:SC-TS-02-2182/16页1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（

3、LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：PorcineCircovirusType2Vaccine,Inacitvated（StrainLG）汉语拼音：ZhuYuanhuanbingduErxingMiehuoyimiao(LGZhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆

4、环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）0902010714.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图生产用PK-15细胞弃液并加入胰蛋白酶，消化细胞加入DMEM液，分散细胞分装，取样检测转瓶制备成细胞悬液﹡转瓶培养同步接种毒﹡36~48h，换维持液﹡细胞病变达70～80%﹡收获﹡半成品检测分装灭活检验*灭活合格抗原说明书、纸箱标签成品检验入库贴签轧盖乳化*反复冻融3次装箱百级区万级区带﹡项为质量控制点十万级区题目 :猪圆环病毒2型灭活疫苗（

5、LG株）工艺规程编号:SC-TS-02-2184/16页4.5质量控制点工序名称控制项目控制标准细胞消化消化液0.125%胰蛋白酶+0.01EDTA溶液；50-100mL/转瓶消化温度37℃消化时间转动转瓶，待细胞层开始出现裂缝时终止，一般为45秒转瓶培养温度37℃恒温室的控制时间细胞生长成单层即可结束培养，一般为24小时左右转速转瓶机设置为10～12转/小时接毒接种量无菌控制下接种，5%无菌检测取样，T.G、G.P、G.A培养基培养应无菌调PH值PH值2日后，无菌，7.5%碳酸氢钠调PH为7.2观察细胞病变情况

6、出现混浊，可能污染，弃去。细胞病变达70%~80%时收获收获无菌无菌控制下操作，不污染灭活灭活剂0.2%的甲醛灭活温度调整灭活罐的温度为37℃灭活时间灭活充分，维持24小时乳化水相、油相比例保证抗原含量并不分层，水相：油相为9:1乳化时间30分钟乳化温度0～10℃4.6活性物质制备工艺过程4.8.1PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养，2～3小时可貼壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭

7、状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。2.细胞纯净性：应无菌、无霉菌、无支原体、无外源病毒污染。3.细胞致瘤性检验：不致瘤。4.细胞核学检查：不同代次的细胞与基础细胞库的细胞相比，所有细胞的染色体模式数不得高出15%，核型必须相同。5.制苗的细胞代次：第20～40代之间。6.细胞保存：液氮保存，保存期为36个月。4.8.2生产用毒种要求u病毒含量：每毫升病毒含量应不低于105.5TCID50u纯净性：病毒应无题目 :猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程编号:SC-TS-02-2

8、185/16页细菌霉菌支原体其它外源病毒u特异性与PCV2阳性血清中和后接种PK15细胞，中和细胞孔IPMA检测无明显着色反应，病毒对照孔呈棕红色染色。u毒种保存与毒种继代1）在-20℃以下保存，应不超过1年。2）继代应不超过3代。4.8.3细胞的传代Ø工艺过程选生长2—3天已形成致密单层的细胞种按常规法进行细胞分散，37℃培养，2～3天传代一次。传代细胞传代时的分种率一