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1、第卷第期实验生物学报,旧年尸拌麦类作物体细胞基因组原位杂交效果影响因素的分析’,’’,’’林小虎李兴锋王黎明陆文辉王洪刚’山东农业大学农学院,国家小麦改良中心泰安分中,心泰安河北科技师范学院,秦皇岛河南科技大学,洛阳、、、以八倍体小滨麦小麦一摘要八倍体小黑麦八倍体小惬麦中间僵麦草双体异附加系为实验材料,、对影响麦类作物体细胞技术实验效果的因素进行分析研究结果表明细胞分裂相多染色体分散良好、无杂质影响的高质量的染色体制片是取得理想实验效果的基础探针浓度与封。,阻浓度的比例及杂交后洗脱条件的控制是取得理想实验效果的关键此外还对麦类作物
2、体细胞基因组原位杂交实验中出现的染色体丢失、外源染色体无杂交信号、杂交信号的强弱、杂交信、,号过多杂交背景重或过少噪音信号及杂交污点产生的原因进行了分析并提出了相应的解决方。法或注意事项关键词麦类作物基因组荧光原位杂交杂交信号,刀、麦类作物是重要的粮食作物麦类作物的遗母以网滨麦草。娜。、拈门传改良具有重要的理论与现实意义利用携带优哪」欧滨麦少”,丙良基因的麦类作物野生近缘物种通过染色体工程等多种植物的染色体或染色体片断,其中包括代换转移外系、附加系、双二倍体、不完全双二倍体、易位系、易位源染色体或外源基因进行抗病或抗逆,一。”易位
3、附加系等多种类育种是麦类作物遗传改良的有效途径而基因组附加系及易位型闪基因组原原位杂交技术是检测外源染色体片段的位杂交技术由于其不需要分离特异性探针,、、。并具有准确快直观等优点被广泛应用于分子细有效手段速胞遗传学领域,尤其是在鉴定远缘杂种外源遗传物质基因组原位杂交。技术是在染色体上直接检测目标的工作中问技术是异源染色体片段的鉴定技,,存在与分布的一种比较理想的技术由和术上的一个较大的突破虽然目前该技术广泛用于各,,两个小组年发明其基本原理是根据核酸分子种麦类作物遗传改良研究工作中但是关于影响麦类,。一作物技术实验效果因素的分析鲜
4、见报道本实碱基互补配对的原则一,将总基因组机械打断或酶消化成小片段后进行标记,获验室对利用染色体工程人工合成的部分麦类作物八、、、一得带有放射性或非放射性标记的核酸片段探针倍体小滨麦八倍体小黑麦八倍体小堰麦小麦中、,然后与被测植物的染色体进行杂交,从而在间堰麦草双体异附加系为实验材料对影响麦类作物,,靶细胞上原位地显示待测物种基因组的位置和数量体细胞技术实验效果的因素进行了综合分析。年等人首次将非放射性标记技术应用并提出了相应的注意事项或解决方法于植物染色体的原位杂交,从而极大地推广了此项技。材料与方法冈术近二十年来已经用此项技术
5、在麦类作物中从远缘杂交后代中检测到新麦草阵卿。”材料、、,、、佗不成川本仍尸中间堰麦草必咬乒袖洲多研究利用的滨麦草卿·枝赖草卿、·刀。。百萨拉比薄冰草尹占本文以〕年月日收到以年月日接受叮、智‘国家自然科学基金资助项目。利大麦二,,。、、一一邵‘,,”通讯作者酬大麦簇毛麦期麦类作物体细胞基因组原位杂交以效果影响因素的分析·,、,一八倍体小滨麦叩引自中含探针的杂交液与染色体制片℃共变性国科学院西北植物研究所,由傅杰先生提供八倍,然后。℃杂交过夜或时间更长,一体小黑麦叩卿劲松引自荧光信号的放大及检测探针用中国农科院作物所中间堰麦草尔娜。
6、进行检测,用适量复染,和的荧光,二原引自中国科学院西北植物研究所,由李信号分别采用型荧光显微镜振声研究员提供八倍体小堰麦和激发虑光片检测染色体显示绿色、黄绿色乡,山农及双体异附加系信号或黄色信号的为外源染色体,显示红色信号的山农是本实验室利用为小麦染色体,机采集图像。中间堰麦草与小麦品种烟农巧杂交、回交再自交从及凡中选出小麦品种烟农、中国春、黑结果与讨论。麦由国家小麦改良中心泰安分中心保存染色体制片质量对实验效果的影响方法比较图版中图和图的效果,从图染色体原位杂交实验基本程序如下不同供试中可以比较清晰地看到八倍体小堰麦山农材料之间
7、有区别的染色体组中含有条中间堰麦草染色体显示染色体制片不同供试材料的种子在℃黄绿色信号和条小麦染色体显示橘红色或红萌发,取适宜根尖冰水浴,卡诺固定液,而从图版,图中就不能很好地鉴定乙醇冰色信号醋酸固定一后,以醋酸为浸润液在相八倍体小堰麦山农的染色体组中含有多少差显微镜下直接压片或充分水洗后用的纤维素条中间堰麦草染色体,这是由于染色体制片的质量一,,,酶及果胶酶公司℃下酶解蒸馏水差异造成的图版图中染色体分散清晰重叠较一,以醋,,,,冲洗酸为浸润液在相差显微镜少染色体长度适宜很容易准确计数而图版图,,,,下压片选染色体分散良好且分裂相
8、多的制片液氮中染色体分散较差重叠较多染色体长度偏长不容,,。。冷冻迅速揭片气干备用易准确计数由此可见染色体制片质量染色体分散基因组的提取及探针标记用清晰,互不重叠或重叠较少,染色体形态良好的制片法提取探针材料滨麦草、中间堰麦草和黑是影响麦类作物体细
