美白剂实验研究及临床应用

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1、美白剂实验研究及临床应用大连医科大学附属第二医院皮肤科涂彩霞1.研究方法2.研究方向3.美白剂的应用1.主要研究方法（1）美白活性成分分析是指通过高效液相色谱等方法对美白化妆品中的美白活性物质进行种类和含量的测定。1.主要研究方法（2）细胞水平功效测定检测内容：黑素含量测定、酪氨酸酶活性、蛋白表达、mRNA水平测定、信号传导通路等。1.主要研究方法（2）细胞水平功效测定1）细胞模型B16黑素瘤细胞大多数研究中，采用B16黑素瘤细胞检测色素抑制作用（PI）1）细胞模型melan-a或mel-ab黑素细胞或正常人黑素细胞(nHEM)正常人黑素

2、细胞(nHEM)更好的模拟体内环境，但黑素细胞更难维持培养。源于小鼠或人皮肤的黑素细胞和角质形成细胞共培养更贴近体内环境，体外系统的皮肤等效模型（SEM）也用于皮肤美白研究。2）主要实验方法酪氨酸酶活性检测方法有放射性同位素法、免疫学法和生化酶学法，其中以生化酶学法较为简单成熟，如氧化多巴法。细胞中色素含量测定是美白化学物功能评价的最重要检测指标。目前多采用生物化学-分光光度法测定黑素细胞中的黑素含量，此法经典稳定。2）主要实验方法信号传导通路蛋白表达—WesternBlot，免疫组化，流式细胞术，ELISA等mRNA转录—Rt-PCR（

3、3）动物实验棕色豚鼠模型黄棕色豚鼠皮肤黑素细胞和黑素小体的分布近似于人类，试验结果重复性好，常采用UV或α-MSH诱导色素沉着。斑马鱼模型对显示美白制剂体内毒性具有意义（4）人体实验视觉评分—主观性强，不精确照相对比—受光线及拍摄条件的影响FoToFinderdermoscope仪，由摄像机和显微镜头组成，可以对色素沉着区进行拍照、放大，并进行图像处理，计算各种参数如皮损大小、边缘情况、结构参数，同时作出安全评价，是一种常用的色斑评价法。（4）人体实验三色分析法：通过检测皮肤表层结构上的紫外可见反射光，采用三维颜色空间分量的定量，来模拟并

4、还原描述人肉眼所看到的物体的颜色，经过计算来综合评价皮肤的色度。（4）人体实验漫反射光谱法：针对皮肤颜色的特征性发色基团，如黑色素、血红蛋白等，选择特定波长扫描，测定皮肤表面的反射光谱，从而对皮肤中的血红蛋白和黑色素等进行定量，其测量参数能较好地从生理学上解释皮肤颜色的改变。（4）人体实验数字化成像定量技术是显微镜照相技术和计算机处理系统的结合，能够对色素沉着进行扫描并进行色度定量，经计算机处理系统进行数据信息的转换，可以计算得出各种发色团的含量，以此来综合评价皮肤色度的变化，从而可对化妆品的祛斑效果进行准确的定量评价。1.研究方法2.研

5、究方向3.美白剂的应用2.主要研究方向2.1抑制酪氨酸酶活性及表达2.2抑制黑素向角质形成细胞转移2.3抑制氧化反应2.4抑制炎症反应2.5调节黑素生成信号通路2.1抑制酪氨酸酶活性或表达4-羟基茴香醚：作为酪氨酸酶替代底物引起色素减退针叶中提取茶多酚或从黑桑树中分离的查尔酮衍生物可抑制酪氨酸酶活性。从大豆胚轴酒曲soygermkoji分离出来的两个8-羟基异黄酮：具有不可逆抑制酪氨酸酶活性作用面包树(Artocarpusincisus)或龙胆(根)(Sophoraflavescens)分离的间苯二酚特有的侧基（与C4,C5或C8位置置换

6、）抑制酪氨酸酶活性2.1抑制酪氨酸酶活性或表达对天然化合物进行修饰，如经Veratrumpatulum提取物的纤维素酶的处理，使二苯乙烯化合物去糖基化，可提高对酪氨酸酶的抑制作用。2.1抑制酪氨酸酶活性或表达N-乙酰氨基葡萄糖(Nacetylglucosamine，NAG)是构成细胞外基质透明质酸的主要成分，局部外用NAG可以减轻女性面部皮肤色素沉着。可能与抑制酪氨酸酶的糖基化有关。2.1抑制酪氨酸酶活性或表达2.2抑制黑素向角质形成细胞转移蛋白酶激活受体2（PAR-2）对于黑素小体从黑素细胞向角质形成细胞的转移非常重要，可以用于皮肤美白

7、的靶点。维生素B3衍生物烟酰胺是一种抑制黑素小体转移的制剂。黑素细胞表达高水平的sAPPsAPP在通过树突末梢释放黑素小粒过程中可能发挥重要的作用阻断sAPP信号可能是另一种影响黑素小体输送的途径2.2抑制黑素向角质形成细胞转移2.3抑制氧化反应减少黑素细胞中活性氧ROS水平可能阻止黑素合成的活化Fujiwara等发现每日给棕色豚鼠服用维生素C（抗坏血酸）、维生素E和半胱氨酸可减少UVB诱导的色素沉着维生素C更稳定的衍生物如抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸棕榈酸酯已被用在不同的皮肤美白配方中2.4抑制炎症介质马尾藻提取物具有抑制炎症介质产生的作用

8、。通过这种间接的方法减少色素细胞内黑素生成。2.5调节黑素生成信号通路2.5调节黑素生成信号通路UV反应通过cAMP和PKA介导信号系统及蛋白激酶C(PKC)，可能增加小眼畸形转录因子(MIT