牛结核防控技术及研究进展

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牛结核防控技术及研究进展 内容提要结核病流行现状牛结核病诊断方法及研究进展牛结核病预防与治疗牛尾静脉采血介绍记录 一、结核病流行现状 结核病概述结核分枝杆菌引起慢性消耗性人畜共患病OIE：强制报告疫病结核性肉芽肿（结节）干酪样坏死或钙化 牛结核病危害奶牛牛奶-人结核病传染源产奶量下降、牛奶品质降低肉牛-时间短饲料报酬低役牛劳动力减弱 人型菌牛型菌禽型菌人犬猫牛马羊猪鸡病原-致病性结核分枝杆菌属人型菌&牛型菌基因水平上99.95%同源感染谱相互交叉10%结核病人感染牛型菌人型菌可感染牛(Chen,2009) 结核病防治的新挑战？人-牛人型与牛型结核菌结核菌在人与牛之间的传播除非扑灭牛结核病，否则人类结核病的控制是不会成功的。——世界卫生组织第七次专家委员会报告 二、牛结核病诊断方法及研究进展 结核菌的细胞免疫与体液免疫规律病程发展免疫反应细胞免疫体液免疫90%结核菌感染者不发病细胞免疫和体液免疫分离早期发生细胞免疫病程后期体液免疫增加 症状潜伏期活动期16-45d长者达数月，甚至数年、终生无明显症状不发病肺结核肺外结核 症状咳嗽虚弱消瘦呼吸困难咳嗽加重鼻孔干酪样鼻汁胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音体表淋巴结肿大 结核病诊断胶体金γ-干扰素ELISAPPD皮试免疫学诊断分子生物学体液免疫细菌学诊断细胞免疫 PPD皮试操作流程剃毛颈侧中部上三分之一测量皮皱厚,记录,标记皮内注射结核菌素PPD稀释成2万单位/ml,注射2000单位/0.1ml测量皮皱厚,记录,标记72小时75%酒精消毒术部;左手捏起皮肤，右手持针管;将针头与皮肤成30-45°角刺入表皮与真皮之间，缓慢注入药液;以局部形成丘疹状隆起为准。 皮试工具 判定标准中国GB/T18645-2002OIE皮内注射0.1ml(2000IU)牛结核菌素,72h后观察皮厚,96与120h再观察一次牛结核菌素单用,或牛与禽结核菌素联用,不少于2000IU,72h后观察阳性:皮厚差大于4mm阴性:皮厚差小于2mm可疑:皮厚差2-4mm疑似牛立即在另一侧用同一批PPD第二次皮试,72h后观察阳性:皮厚差大于4mm阴性:皮厚差小于2mm可疑牛42天后重作皮试牛与禽结核菌素联用时,牛结核菌素皮厚差大于禽结核菌素皮厚差4mm为阳性,1-4mm为可疑,小于或等于禽结核菌素皮厚差为阴性 结核菌素皮内变态反应的特点世界动物卫生组织OIE迄今为止唯一推荐的牛结核病的诊断方法非特异性反应重症牛敏感性低操作复杂烦琐结果判断主观性大 IFN-检测方法检测OD值并确定IFN-g水平抽取全血ESAT-6CFP-10有丝分裂原对照将全血转移至培养孔中,加入抗原培养过夜吸取上层血浆进行夹心ELISA检测,温育60分钟洗涤,加底物,作用30分钟后终止反应TMB显色IFN-gIU/mlOD450nm标准曲线步骤1全血培养步骤2IFN-gammaELISA阴性对照 IFN-释放检测特点诊断潜伏感染及活动性结核病高特异性，高敏感性外周血，24h出结果比TST更贵，采血后在12小时内检测BoviTBIFN-gammakit目前发达国家均以该方法辅助进行结核病根除计划 牛结核病特异抗体检测方法ELISA方法胶体金方法Rv3872CFP10ESAT6MPB70MPB83 牛结核特异抗体检测检测针对特异抗原（单个或多个）的抗体抗体消长规律复杂！总体而言抗体水平与病程发展成正比抗体针对的抗原，抗体类型，抗体水平因个体而异，因时而异方法敏感性低多抗原联合使用及与TST联合使用可显著提高检出率 三、牛结核病预防和治疗 预防检疫分群隔离培育健康牛犊消毒5%来苏儿或3%氢氧化钠或0.1%-0.5%过氧乙酸消毒畜舍、饲养用具和运动场牛奶消毒后出场 治疗早期氨基水杨酸钠、异烟肼难以根除价值不大控制根除计划—扑杀 四、牛尾静脉采血介绍 尾静脉采血优点方便快速一般不需要保定减小应激 尾静脉采血方法牛尾静脉位于尾椎腹侧正中的脉管沟内左手抓住尾巴垂直上举,右手用镊子取5%碘酒棉球在尾根1/2～1/3处(离尾根处7-15cm)进行消毒手持9号采血器,顺血管斜角刺入,见有血液回流,即可外拉针芯使血液流入采血器采血完毕,局部消毒适当按压 采血工具 血液处理抗凝血真空采血管或其它容器内抗凝剂。采集的血液立即与抗凝剂充分混合，防止凝固肝素：1%肝素0.1毫升可抗凝5-10毫升血EDTA：每毫升血加入20mg枸缘酸钠：每毫升血加入3-5mg血清标记，室温静置凝固后吸取自然析出的血清或经离心分离分装，再贴上标签冷藏保存备检 五、记录 畜主时间皮厚增加(mm)牛号皮皱厚(mm)操作者皮皱厚(mm)备注记录卡 谢谢！健康养殖奶业腾达