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1、酶型（Isoenzyme)李建金中山大学中山医学院法医物证教研室第一节概述酶型的定义又称同工酶：分子结构不同，但催化同一生化反应的一组酶。或酶的多态性定义：同DNA。www.themegallery.comLOGO第一节概述酶型的分类多位点基因控制的同工酶：如LDH,PGM。单位点复等位基因控制的同工酶：如EAP，EsD。遗传变异体同工酶：点突变所致。如G6PD。次级同工酶（修饰同工酶）：脱氨、乙酰化等所致。www.themegallery.comLOGO第一节概述酶的一些特点酶的本质是蛋白质酶促反应的高度专一性：催化特定的
2、底物。酶反应的最适PH酶反应的最适温度酶多为水溶性酶多不耐热www.themegallery.comLOGO第一节概述电泳检测酶型的基本原理传统电泳：等电点、分子大小。等电聚焦电泳：等电点。影响电泳的因素：电场强度、缓冲液（PH值、离子强度）、胶浓度、电泳时间、产热等。www.themegallery.comLOGO红细胞酸性磷酸酶（ErythrocyteAcidPhosphatase.EAP)概况EAP（ACP1）、PAP、ACP2EAP是第一个被报道具有多态的酶。单亚基结构，基因定位于2P25，等电点为5-7，酶反应的最
3、适PH为5.5。分型1963年（Hopkinson),Nature杂志上报导EAP可分为A、BA、B、CA、CB五种型。进行了家系调查，有三个共显性等位基因：P(A）、P（B）、P（C）。在东方人群中，常见的基因为：P（A）、P（B）；常见的表型为：A、BA、B。另有多个稀有基因的报导。EAP表型的检测1、1%琼脂糖凝胶电泳2、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳显色：4-甲基伞形酮磷酸盐（EAP）4-甲基伞形酮兰色荧光磷酸葡萄糖变位酶 （Phosphoglucomutase,PGM)PGM1（其基因在1号染色体）：等电点为5-7，最
4、适pH8PGM2（其基因在4号染色体）PGM3（其基因在6号染色体）：胎盘PGM4（其基因未详）：乳汁中红细胞中只有PGM1与PGM2，活性各半分型淀粉凝胶电泳，PGM可分出a,b,c,d,e,f,g七条带。e,f,g几乎每人都一样。分为三型：PGM1（a,c)、PGM2（b,d)，PGM2-1(a,b,c,d)。1965年（Hopkinson),发现e,f,g带亦存在变异。前者称为PGM1，由PGM1（1）、PGM2（2）二个共显性等位基因控制，三种常见表型。后者称为PGM2。1976年（Bark)，用等电聚焦电泳，将PG
5、M1分出十种常见的表型。分别由PGM1（1+）、PGM1（1-）、PGM1（2+）、PGM1（2-）四个共显性等位基因控制。PGM1表型的检测1、淀粉凝胶电泳2、聚丙稀酰胺凝胶等电聚焦电泳G1P（PGM、G16P）NADP2+MTT（PMS）6PG+NADP2G6P（G6PD、NADP）脂酶D（EsteraseD,EsD）脂酶共有二十余种，可分为特异性脂酶和非特异性脂酶。红细胞中的脂酶有A、B、C、D四种，只有EsD具有多态性。等电点为4-6，酶反应的最适PH5.5。分型：1973年（Hopkinson），分为三种常见表型，
6、由ESD1、ESD2二个共显性等位基因控制。ESD表型的检测1、1%琼脂糖凝胶电泳2、等电聚焦电泳4-甲基伞形酮醋酸盐兰色荧光4-甲基伞形酮乙二醛酶I（GlyoxalaseI,GLOI)双亚基结构，分布广泛，红细胞中活性最高。等电点为4.3左右；反应最适PH为6.5。基因位点与HLA基因毗邻（6P213），1975年（Kompf）报导，三种常见表型。由GLOI（1）、GLOI（2）二个共显性等位基因控制。分型GLOI表型的检测琼脂糖/可溶性淀粉混和凝胶电泳显色：甲基乙二醛（GLOI、还原型GSH）---氧化型GHS。淀粉+碘
7、---兰色（还原型GSH可使兰色褪掉）。谷丙转氨酶GlutamicPyruvicTransaminaseGPT催化谷氨酸与丙氨酸互换。酶反应的最适PH约为8双亚基结构。三种常见表型，由GPT（1）、GPT（2）二个共显性等位基因控制。混合淀粉凝胶电泳显色：1、丙氨酸（GPT）--谷氨酸（GLD、NADP）--NADPH2（MTT、PMS）--兰色。2、丙氨酸（GPT）--谷氨酸+丙酮酸（LDH、NADH）---乳酸+NAD（无荧光）。1、酶活性丧失（不可逆）。2、潮湿环境下，脱氨，蛋白负电荷增加，无法正确分型（仍有活性）。3
8、、-SH被氧化，形成二硫化合物，可逆性失活（可用巯基还原剂复活）。0.18M巯基乙醇；0.05M二硫苏糖醇。血痕酶的改变思考题利用电泳检测红细胞酶型、血清蛋白型，若遇到谱带分离不开时，应如何调整实验条件？谢谢，再见！
