南京科捷液相知识讲座

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1、欢迎光临日程安排HPLC维护YounglinHPLC日常维护常见问题解答FAQ日常使用及维护现场演示韩国英麟机器北京代表处技术服务中心赵紫来(O)010-65305879zhaozilai@gmail.comHPLC故障诊断技术TroubleshootingI.I.流动相的相关问题检测器背景过高,有时引起基线溢出.溶剂的级别及处理方法由于除去了有机或无机污染物，所以使用纯水对系统是非常理想的.现在的纯水系统都可以给出水中总有机碳的值.流动相可能引出的问题梯度洗脱时出现鬼峰!溶剂级别及处理方法如果水的质量很差，在梯度洗脱时，有可能出现鬼峰!溶剂级别及处理方法不同的分析

2、及HPLC流动相级别溶剂级别及处理方法注意HPLC级别的溶剂只允许有低UV吸收的杂质存在.使用前，所有流动相都应该经0.45um滤膜过滤.如果溶剂有背景吸收,-线性范围会下降-噪音会增加-基线的稳定性会受影响。溶剂级别及处理方法在配置，处理HPLC级别溶剂的注意事项:1.THF分析级的THF包含butylatedhydroxytoluene(BHT)作为抗氧化抑制剂.因为BHT有很强的紫外吸收,所以在HPLC级别的THF中没有BHT.因此,HPLC级别的THF必须储藏在冷暗的地方，尽量避免氧化.积累了大量的有机氧化物可能会引起爆炸.溶剂级别及处理方法2.氯仿Chlo

3、roform分析级的氯仿包含3%乙醇，以防止产生碳酰氯这样的有毒气体.然而，像乙醇，水在正相分离中可以使硅胶去活，从而导致保留时间不稳定。HPLC级的氯仿不包含作为稳定剂的乙醇.因此，一旦打开盖子，就应放到冷暗的地方保存，以避免产生有毒气体.流动相可能引出的问题当流动相中使用了缓冲溶液，那么泵压将会明显增加.溶剂级别及处理方法使用缓冲溶液使用前必先过滤溶液.为了避免结晶，系统中不能有残留溶液::对泵的影响–破坏推杆及密封垫:对色谱柱的影响–导致柱塌陷:对流路的影响–腐蚀不锈钢流路注意可能长菌:特别是磷酸缓冲液-是细菌，菌类物质生长很好的介质.理想状态，应该每天配置新

4、鲜的缓冲液（尤其夏天）.溶剂级别及处理方法溶剂过滤装置流动相可能引出的问题当流动相由有机溶剂换成缓冲溶液时，经常会出现沉淀等问题.溶剂级别及处理方法流动相的改变步骤溶剂级别及处理方法缓冲溶液有机溶剂溶剂级别及处理方法在系统更换全部有机流动相之前，应注意以下几点,系统应用水/有机相（1：1）比例混合，来去除曾经用过的缓冲溶液。否则，当有机相遇到残留的缓冲液时，系统会出现结晶的现象。流动相可能引出的问题不同的操作者配置的流动相，可能保留时间会不同.溶剂级别及处理方法溶剂的预混合对于单元系统,分析前我们经常要预先配好混合溶剂.例如：要配置100ml的50:50甲醇和水的混

5、合溶剂,我们可以:1.各称量50ml的水和50ml甲醇，再把它们混合到一起.2.称量50ml水，再用甲醇定容到100ml容器中。3.称量50ml甲醇，用水定容到100ml容器中.所有这三种方法都将获得不同的结果。无论选用哪种，都应一直使用这种方法，以获得较好的重复性。推荐使用第一种方法。流动相可能引出的问题溶剂瓶的问题1.容器一般使用玻璃，因为塑料增塑剂有可能会导致基线不稳或是污染柱子。当分析高灵敏度无机离子时，应避免使用玻璃容器。2.容器开口处应尽量小。这样可以避免由于溶剂的快速挥发导致的浓度不稳定，这样也可以降低房间中的挥发物浓度。注意不要将容器完全密封，这样会

6、导致局部真空，泵不上液体。溶剂瓶的问题3.当使用不太稳定的溶剂时,或者每天制备新的溶剂，或者在溶剂瓶中充入惰性气体，例如氦气。4.不要将溶剂直接放在通风口，窗口或是门口；不要直接放在阳光下。这样会导致温度的变化，增加挥发。通常情况下，对RI检测器影响最大，有时候也会影响到UV检测器。5.一般情况下，要将溶剂瓶放置在高于溶剂传输系统（泵）的位置，这样可以保证泵有好的虹吸效果，同时避免泵空走。溶剂瓶的问题6.通常使用溶剂过滤器，这是一个粗滤，可以保证溶剂中的颗粒不会进入泵头。要保证这个滤头清洁，无菌。如果脏了，可以用异丙醇或是1N的硝酸超声清洗。7.实验室中好的习惯是在

7、溶剂瓶上贴上标签，表明内部溶剂的名称，组成甚至制备的日期。II.样品可能引出的问题进样后，系统压力都会迅速增加。样品处理问题1.通常都是将样品溶解在流动相中，流动相中样品的溶解度是最好的.-减小溶剂峰，尤其是感兴趣的样品洗脱出来离溶剂峰很近的情况。-保证样品在流动相中的溶解度，保证在系统，特别是柱子中不出现沉淀凝结的现象。-保证样品溶液与流动相之间的可混合性。2.通常进样前，我们用0.45um的过滤膜过滤样品。如果预先知道样品很脏，可以在进样前用0.2um的过滤膜过滤III.进样可能引出的问题手动进样，重现性不好。Rheodyne手动进样器1.部分充满定量环进样