(最新)鸡消化道乳酸杆菌的黏附研究

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1、山东农业大学博士学位论文鸡消化道乳酸杆菌的黏附研究姓名：林雪彦申请学位级别：博士专业：预防兽医学指导教师：牛钟相20060612英文缩写AGPCEFcellCaCo．2celldELISAhKDaMDCKcellmlnmlnagimlOPDODPBSP瓜DH“mlnSDSSDS．PAGESPFul符号说明英文全称或注释agargelprecipifintestchickenembryofibroblastsintestinalepithelialcelldayenzyme—linked—immunosorb

2、entassaygramhourkiloDaltondogkidneycellminutemillilitermilligramorthophenylenediamineopticaldensityphosphate·buffersalinepositive-control／negative-control阳性值roundsperminutesodiumdodecylsulfateSDS-polyacrylamidegellectrophoresisspecificpathogenfreemicrolitr

3、e中文全称琼脂扩散试验鸡胚成纤维细胞人的结肠癌细胞系天酶联免疫吸附试验克小时千道尔顿犬肾细胞分钟毫升毫克纳米邻苯二胺光密度值磷酸盐缓冲液空白值／阴性值一空白值酸碱度辕f食十二烷基磺酸钠SDS一聚丙酰胺凝胶电泳无特定病原体微升关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有

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5、乳酸i一杆菌黏附消化道上皮细胞的状态情况进行了观察；选取了高粘附性乳酸杆菌菌株(SD。A、SDnB，和SDnE．)；确定了乳酸杆菌SD。A株黏附消化道上皮细胞黏附因子性质；对乳酸杆菌sD。A株粘附配体蛋白和鸡消化道上皮细胞受体蛋白，进行了提取、纯化与鉴定：制各了兔抗鸡乳酸杆菌SD。A株黏附配体和上皮细胞受体蛋白血清；在此基础上测定了不同日龄和病鸡消化道中乳酸杆菌黏附配体和受体蛋白的含量；最后确定了影响乳酸杆菌粘附消化道上皮细胞的不同条件。本研究共分九部分。第～部分健康与患病鸡消化道中正常菌分布交化超微观察利

6、用扫描电镜对健康与患球虫(柔嫩艾美耳球虫)病鸡消化道中正常菌群黏附状况进行了观察。结果发现，健康鸡消化道(嗉囊、回肠和盲肠部位)粘膜表面均匀覆盖着大量的正常菌群，尤其嗉囊表面黏附着致密的乳酸杆菌。回肠部位正常菌多而粘膜完整。而患球虫病鸡消化道(嗉囊、回肠和盲肠部位)粘膜已脱落，正常菌群数量明显减少。第二部分乳酸杆菌黏附消化道上皮细胞状态超微观察用扫描电镜对健康鸡嗉囊黏膜表面正常菌群与黏膜上皮细胞结合的状态进行了观察，结果发现，嗉囊黏膜表面覆盖着大量的乳酸杆菌，其表面以伪足样丝状物与嗉囊黏膜细胞紧密结合。同时

7、用透射电镜对乳酸杆菌粘附CaCo一2cell的状态进行了观察，结^果发现，上皮细胞与乳酸杆菌相结合后其结构朱发生变化，菌体结构完整。第三部分宿主特异性高粘附性乳酸杆菌菌株筛选的研究选取5株鸡消化道乳酸杆菌株，分别与CaCo一2、MDCK、CEFeell结合3h和24h，观察其黏附性。结果表明，不同菌株与三种细胞的黏附效果不同。其中乳酸杆菌菌株SDnB，、SDnE．和SDnA黏附CaCo一2cell效果较好，而SDnA与SDnB。株黏附CEFcell效果较好，乳酸杆菌对MDCKcell几乎不黏附：菌株的培养时

8、间长短对其黏附CaCo一2cell效果的影响试验表明，培养2d的乳酸杆菌黏附性较好；乳酸杆菌与CaCo-2cell作用24h比作用3h黏附菌数多；不同菌株浓度(10"、10i、106、105和101个／m1)对CaCo一2cell的黏附程度不同。108组的细胞黏附菌株数量较多。第四部分乳酸杆菌黏附肠道上皮细胞黏附因子性质的研究乳酸杆菌依靠表面的黏附物质黏附于肠道上皮细胞上。为了进一步确定黏附因子性鸡消化道乳酸杆菌