缺血性卒中后基因治疗的现状与展望

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1、http://www.paper.edu.cn缺血性卒中后基因治疗的现状与展望付强（山东中医药大学山东济南250014）E-mail:fqtcm@yahoo.com.cn摘要：基因治疗有优于经典药物治疗的特点。如可直接将DNA注入脑内，在相对局部环境，提供高浓度治疗剂；基因治疗也比传统药物提供更长的作用时间等。近几年随着基因载体和导入技术的应用和拓宽，缺血性卒中基因治疗研究已蓬勃发展起来，最新成就令人鼓舞，但应用于临床仍还有许多问题亟待解决。本文对基因治疗缺血性卒中的机理、方法、转移载体、基因传递系统及

2、转移方式等方面的研究进行综述。关键词：缺血性卒中；基因治疗；综述1.引言缺血性卒中是一种常见、多发病，多在中年期后发病。由于其并发症、致残率及死亡率均较高，因而严重威胁着人类的健康和生命。急性缺血性卒中治疗的目标是挽救梗死灶周围的缺血半暗带或半影区(penumbra)，为此，临床上采用扩容、抗凝、溶栓、钙通道阻滞剂、NMDAR拮抗剂、抑制性氨基酸和自由基清除剂等方法试图增加半暗带的血液供应，或保护神经组织，减轻神经组织损伤，但目前还没有任何一种方法可以单独达到目的。2000年6月26日，人类核基因组测序

3、宣告完成。基因疗法已成为临床治疗缺血性卒中的一个新思路。随着近年导管血管基因转移技术的成熟，特别是颈动脉和颅内血管基因转移在体内和体外(invivoandinvitro)的成功实施，使缺血性卒中的基因治疗研究不断发展，并就目前的研究基础提出了未来研究的方向，现综述如下：2.基因治疗缺血性卒中的机理缺血后的脑组织可分为：缺血中心区、围绕梗死中心的半暗带以及围绕半暗带的周边带。脑缺血的基因治疗是在半暗带注入外源性基因或改变神经元的基因表达，使组织通过改善血流动力学或改变特殊的分子、细胞学和生物学机制，从而保

4、护或抑制神经元的损伤。基因治疗的基本目标是采用高效的表达载体（如腺病毒）或DNA阳离子脂质体复合物与病毒结合体，将目的基因cDNA导入脑血管或血管周围组织，并表达有利于血管生长或调控周围组织功能的物质。从而促进血管内皮增生、形成新生血管、抑制炎症反应和自由基等的毒性作用及抑制[1]细胞凋亡等。对于中枢神经系统等无法反复操作的部位，尝试基因治疗是有意义的。与以往的疗法相比，基因治疗的优势在于它可以持续表达细胞趋化或生长因子，对靶细胞产生较为持久的作用，但基因载体的免疫源性可能会带来一些远期的不利影响。3.

5、缺血性卒中的基因疗法3.1转Bcl－2基因-1-http://www.paper.edu.cn为了进一步证明Bcl－2在脑缺血中的作用，近年来许多学者运用转基因技术使凋亡抑[2]制基因Bcl－2过度表达以保护神经元不致发生死亡。Shimazaki等在前脑缺血5d前转导rAAV载体介导的Bcl－2基因（AAV－Bcl－2），可阻止CA1区神经元DNA断裂，而且，AAV－Bcl－2在缺血后1h应用也可阻止CA1区神经元DNA断裂。这些结果表明，Bcl－2蛋白有神经[3]保护作用，能抑制缺血细胞死亡。近年来C

6、ao等用结构型巨细胞病毒启动子（constitutivecytomegaloviruspromoter,pCMV）和以缺氧诱导的促人血管内皮生长因子（pHRE）为基础的两种不同类型的质粒介导Bcl－2表达。将带阳离子的脂质体/质粒DNA复合物在MCAO后立即注入大鼠脑脊液中，48h后对治疗组和对照组梗死体积和凋亡细胞数进行分析。结果发现，pCMV－Bcl－2组梗死体积明显缩小，但pCMV－Bcl－2组和pHRE－Bcl－2组梗死区和半暗带凋亡细胞数均较对照组明显减少，且脂质体/质粒复合物进行脑脊液注射短

7、期内无不良反应。以上不同的实验方法都表明，转Bcl－2基因对缺血性脑血管病的治疗有效。目前，虽然转Bcl－2治疗缺血性卒中的实验研究都取得了很好的结果，但其作用机制却不太清楚。有学者认为与抑制Ca2＋释放有关，也有学者认为Bcl－2通过阻止促凋亡基因的信号传递或阻止这些诱导基因产物而发挥抗细胞凋亡作用，还有人认为Bcl－2可通过抑制自由基而发挥抗凋亡作用。这些假说都是我们今后研究的方向和重点，有待有所突破。另外，转Bcl－2基因治疗所用方法由于存在各种局限性不利于临床应用。构建高效特异性靶向的载体和探索

8、简便、易行、安全的基因转移途径，成为目前转Bcl－2基因治疗的关键，这也是其它目的基因治疗缺血性卒中的重要环节，许多学者在致力于此方面的研究。吕筱华[4]等将介导Lac－Z基因的缺陷型HSV载体接种于猴嗅神经末梢，接种后4天，在嗅中枢皮质神经元内检测到β－半乳糖苷酶活性，并持续1个月以上，脑组织及全身脏器未见病理学及免疫学改变，证明HSV－Ｉ载体可通过嗅神经通路将外源性基因导入中枢神经系统并在其中表达，这样的基因转移系统操作简单，无创伤性，