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时间:2019-05-24
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1、小鼠GV期卵母细胞的提取及其核质比分析作者:洪灯,符皎荣,张彦慧,钟南田,郑小桃单位:海南医学院组织学与胚胎学教研室,海南海口【摘要】目的:提取小鼠GV(germinalvesicle,GV)期卵母细胞并分析其核质比。方法:用挤压法从卵巢中分离获得GV期卵母细胞,放入DEPC-NS液体快速清除颗粒细胞,获得GV期卵母细胞裸卵,并计算其核质比。结果:用挤压法分离获得的GV期卵母细胞有一完整球形核,核膜明显,含有单个折光的核仁,胞浆中心稍变黑并呈颗粒状,共51枚,测得其卵径为(40.940±3.341)μm,核径为(15.020
2、±2.236)μm,其核质比为0.054±0.019。结论:用挤压法加DEPC-NS液体可快速破坏颗粒细胞之间的连接,便于迅速获得GV期卵母细胞裸卵;小鼠GV期卵母细胞的核质比为0.054±0.019,与其它物种同时相核质比在相同范围内,提示核质比是卵母细胞发育成熟的重要指标。【关键词】小鼠;GV期卵母细胞;挤压法;核质比[ABSTRACT]Objective:ToextracttheGV-stageoocytesofmouseandanalyzeditsthenucleus-plasmarati
3、o.Methods:GV-stageoocyteswereextractedandisolatedbyextrusion.GranulosacellswerequicklyremovedinDEPC-NSliquidanddenudedoocyteswereobtained.Thenucleus-plasmaratioofthedenudedoocyteswascaculated.Results:TheGV-stageoocyteshadcompletesphericalnucleuswithobviousnuclearmembrane,and
4、asinglerefractivenucleolus.Itscytoplasmcenterwasalittleblackandingranular.Atotalof51GV-stageeggswereobtained,whichwere(40.940±3.341)μmindiameterand(15.020±2.236)μmincorediameter,andthenucleus-plasmaratiowas0.054±0.019.Conclusions:Theextrusionmethod
5、andDEPC-NSliquidcanrapidlydestructtheconnectionbetweenthegranulosacells,inwhichthedenudedGV-stageoocytesareeasytoobtain.Thenucleus-plasmaratiointhemiceGV-stageoocytesis0.054±0.019,whileissimilartootherreports.Itsuggeststhatthenucleus-plasmaratioisanimportantindicatoro
6、foocytematuration.[KEYWORDS]Mouse;GV-stageoocytes;Extrusionmethod;Nucleus-plasmaratio辅助生殖研究领域的一个重要内容是卵母细胞体外成熟(IVM),通过提取生发泡(GV)期卵母细胞,模拟体内的成熟环境,在体外使卵母细胞达到最后成熟。GV期卵母细胞是卵原细胞成为初级卵母细胞之后,经细线期、偶线期、粗线期发育到双线期。在双线期后期,卵母细胞的核很大,染色质高度疏松,外包完整的核膜,此时的细胞核又称GV[1]。小鼠卵母细胞生长到卵泡腔形成时就已完成,卵泡腔形成之前的卵母
7、细胞处于GV期,此期卵母细胞的大小决定成熟卵母细胞的大小,卵母细胞的大小决定其恢复减数分裂和完成成熟的能力。本实验拟以小鼠为研究对象,获取其卵巢中GV期卵母细胞,并快速清除其上的颗粒细胞和透明带,为辅助生殖的研究提供方便快捷的GV期卵母细胞的裸卵。1 材料与方法1.1 材料健康未孕雌性昆明小鼠20只,鼠龄7~8周,体重20~30g,均购自海南省人民医院动物实验室。自由饮食取水,维持光控时间为12∶12(光亮时间为6~18时,黑暗时间为18~6时)。1.2 主要仪器与试剂微量移液器(法国Gilson公司,P10,P20,P200,P1000);L
8、eicaMps60倒置显微镜(德国);体视显微镜;毛细玻璃管;一次性塑料培养皿;手术剪。试剂和溶液:DEPC-NS。1.3 获取GV期卵母细胞(1)获
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