小鼠GV期卵母细胞的提取及其核质比分析

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1、小鼠GV期卵母细胞的提取及其核质比分析作者：洪灯,符皎荣,张彦慧,钟南田,郑小桃单位：海南医学院组织学与胚胎学教研室，海南海口【摘要】目的：提取小鼠GV(germinalvesicle，GV)期卵母细胞并分析其核质比。方法：用挤压法从卵巢中分离获得GV期卵母细胞，放入DEPC-NS液体快速清除颗粒细胞，获得GV期卵母细胞裸卵，并计算其核质比。结果：用挤压法分离获得的GV期卵母细胞有一完整球形核，核膜明显，含有单个折光的核仁，胞浆中心稍变黑并呈颗粒状，共51枚，测得其卵径为(40.940±3.341)μm，核径为(15.020

2、±2.236)μm，其核质比为0.054±0.019。结论：用挤压法加DEPC-NS液体可快速破坏颗粒细胞之间的连接，便于迅速获得GV期卵母细胞裸卵;小鼠GV期卵母细胞的核质比为0.054±0.019，与其它物种同时相核质比在相同范围内，提示核质比是卵母细胞发育成熟的重要指标。【关键词】小鼠;GV期卵母细胞;挤压法;核质比[ABSTRACT]Objective：ToextracttheGV-stageoocytesofmouseandanalyzeditsthenucleus-plasmarati

3、o.Methods：GV-stageoocyteswereextractedandisolatedbyextrusion.GranulosacellswerequicklyremovedinDEPC-NSliquidanddenudedoocyteswereobtained.Thenucleus-plasmaratioofthedenudedoocyteswascaculated.Results：TheGV-stageoocyteshadcompletesphericalnucleuswithobviousnuclearmembrane，and

4、asinglerefractivenucleolus.Itscytoplasmcenterwasalittleblackandingranular.Atotalof51GV-stageeggswereobtained，whichwere(40.940±3.341)μmindiameterand(15.020±2.236)μmincorediameter，andthenucleus-plasmaratiowas0.054±0.019.Conclusions：Theextrusionmethod

5、andDEPC-NSliquidcanrapidlydestructtheconnectionbetweenthegranulosacells，inwhichthedenudedGV-stageoocytesareeasytoobtain.Thenucleus-plasmaratiointhemiceGV-stageoocytesis0.054±0.019，whileissimilartootherreports.Itsuggeststhatthenucleus-plasmaratioisanimportantindicatoro

6、foocytematuration.[KEYWORDS]Mouse;GV-stageoocytes;Extrusionmethod;Nucleus-plasmaratio辅助生殖研究领域的一个重要内容是卵母细胞体外成熟(IVM)，通过提取生发泡(GV)期卵母细胞，模拟体内的成熟环境，在体外使卵母细胞达到最后成熟。GV期卵母细胞是卵原细胞成为初级卵母细胞之后，经细线期、偶线期、粗线期发育到双线期。在双线期后期，卵母细胞的核很大，染色质高度疏松，外包完整的核膜，此时的细胞核又称GV[1]。小鼠卵母细胞生长到卵泡腔形成时就已完成，卵泡腔形成之前的卵母

7、细胞处于GV期，此期卵母细胞的大小决定成熟卵母细胞的大小，卵母细胞的大小决定其恢复减数分裂和完成成熟的能力。本实验拟以小鼠为研究对象，获取其卵巢中GV期卵母细胞，并快速清除其上的颗粒细胞和透明带，为辅助生殖的研究提供方便快捷的GV期卵母细胞的裸卵。1　材料与方法1.1　材料健康未孕雌性昆明小鼠20只，鼠龄7～8周，体重20～30g，均购自海南省人民医院动物实验室。自由饮食取水，维持光控时间为12∶12(光亮时间为6～18时，黑暗时间为18～6时)。1.2　主要仪器与试剂微量移液器(法国Gilson公司，P10，P20，P200，P1000);L

8、eicaMps60倒置显微镜(德国);体视显微镜;毛细玻璃管;一次性塑料培养皿;手术剪。试剂和溶液：DEPC-NS。1.3　获取GV期卵母细胞(1)获