杀菌剂的毒力测定和

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1、第三节杀菌剂的毒力测定和田间药效试验一、毒力测定杀菌剂对病菌的毒力是指药剂本身对病原菌直接作用的性质和程度，它是在严格控制条件下测定的，常用有效中量（ED50）表示，是指抑制50%病菌孢子萌发所需的剂量或有效中浓度（EC50）。杀菌剂的毒力测定方法很多，长期采用经典的离体平板法，即以孢子萌发，抑制孢子发芽率或菌丝生长、变色、变形等指标作为毒力衡量的标准。但近代随着新型内吸杀菌剂的发展，对杀菌剂的生物筛选逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。因为它不仅模拟田间实际，同时可以防止那些在离体平板上无效，而必须在植物活体上方显示活

2、性的化合物漏筛。但活体筛选涉及的因素较多，对寄主植物、试验条件要求较高，如光照、湿度、温度，为控制病原菌与寄主相互作用的条件，必须有适合的温室，费工耗资都较大。离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为研制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体的盆栽试验结合起来。1.毒力测定的方法室内离体平板法：（1）孢子萌发测定法（2）抑菌圈法（3）生长速率测定法（1）孢子萌发测定法有载玻片萌发法及平板培养基培养法。即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量滴加孢子悬浮液，药液与悬浮液接触后，经一定培育时间，镜检孢子

3、萌发的百分率，载玻片法适合于水溶性较好的保护剂，能计算单位面积药液的沉积量及药液浓度，接近实际条件，但对萌发时需氧较多的病原菌不适用。平板萌发适用于不易分解的保护剂，根据测定对象生长需要的配方来制备合适的培养基，由于孢子在培养基的表面能得到较充足的空气，萌发时不致因缺少氧而受影响。（2）抑菌圈法广泛地应用于真菌细菌的杀菌剂筛选，基本原理是将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀冷凝后，在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药剂的圆形滤纸片（直径6mm）左右，或放特制的直径8mm高10mm的不锈钢环，将配好的药液定量加在钢环

4、内，经定温培养一定时间后，由于药剂的扩散作用，使病菌生长受到抑制，即形成“抑菌圈”。测量抑菌圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。（3）生长速率测定法即在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接菌的方法，用木塞钻孔器切取正常培养基上的供试菌丝体，放在平板上（也称菌碟），经一定时间后观察测量菌落生长速率，一定时间菌落直径的长度与对照组比较，求出抑制百分率，绘浓度对数---抑制百分率毒力曲线图，以ED50来比较毒力程度。平板测定是室内杀菌剂活性测定最常用的方法，优点是条件比较一致，影响因子比较单一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测定结果不一

5、致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原---寄主植物组合法。2．盆栽方法在温室内进行的，具体方法随各种不同病害而异，例：小麦赤霉病采用分生孢子---幼苗组合法，根据杀菌剂物不同作用机理，有测定以下作用的方法。（1）保护作用；（2）治疗作用；（3）内吸作用。（1）保护作用：一般经定量喷雾法处理供试植物，喷药后间隔一定的时间再接种（方法很多，如多针接种，剪叶法或将菌丝块贴在叶片上等），保持发病所需的温、湿度

6、条件，发病后再按病情分级标准进行统计，以病叶率，病情指数增长等指标判断药效。（2）治疗作用：测定方法是先在植株上接菌，保温，保湿一定时间，待病菌菌丝侵入或始见发病，再进行喷药处理，其他调查统计方法同上。（3）内吸作用：测定根的内吸输导试验，可以采用水培的稻株或棉株，在营养液中加定量的药剂，待24h或48h后进行接菌，发病后调查，若以土培盆栽方法，则药液定量灌入土中，程序与上相同。持效期的试验：以上各种方法，用先喷药后接菌或先接菌后喷药，间隔不同日期进行处理，可以测定杀菌剂残效。剪叶法分级标准：0级（不发病）；1级（＜剩余叶

7、面1/4）；2级（剩余叶面1/4-1/2）；3级（＞剩余叶面1/2）；4级（全部发病）。二、有效中量的测定采用一系列的药剂剂量或浓度，每一剂量或浓度可以得出一个相应的孢子抑制百分率，得到两组数据，然后把各剂量换算成对数值，将抑制百分率换算成几率值，将换算后的5对数据建立回归方程，在直坐标系中画出回归直线，此直线称为剂量对数---抑制百分率几率值直线（ED-P-line直线）。抑制百分率=50%，机率值=5将5代入回归方程，然后求其反对数，即LD-P-Line（剂量对数---机率值直线）。ED50可以作为多种药剂对同一病菌等

8、效剂量的毒力比较，在一定的范围内可以用它来衡量一种药剂对病原菌毒力的大小，但不能做为田间防治的实际指标。三、田间试验室内筛选的药剂必须进行田间试验，通过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，也就是说，田间试验是确定一种药剂在生产上有无实用价值的主要方法。田间实验的具体方法可参考《农药药效试验的设计与分析