酶工程复习资料

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1、名词解释酶由生物或人工合成的具有催化特定反应能力的蛋白质、RNA或其复合体。酶工程酶制剂的大批量生产和应用的技术。它从应用的目的出发,将酶学理论与化学工程相结合研究酶,并在一定的反应装置中利用酶的催化特性,将原料转化为产物的一门新技术,主要由酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和生物反应器四个部分组成。酶活性中心酶分子表面直接与底物结合,并和酶催化作用直接有关的部位。必需氨基酸人体自身不能合成或者合成速度不能满足人体需要,必须从食物中摄取的氨基酸必需基团包括活性部位(催化基团和结合基团)和活性中心外维持酶的空间结构的必须基团反

2、应活化能分子由常态转变为活化状态所需的能量。是指在一定温度下,1mol反应物全部进入活化状态所需的自由能。单纯酶只含蛋白质的酶或含不参与催化过程的非蛋白质组分的酶全酶(结合酶)由蛋白质组分(即酶蛋白)和非蛋白质组分(一般为辅酶或激活物)组成的一种结合酶或含有表达全部酶活性和调节活性所需的所有亚基的一种全寡聚酶。全酶=酶蛋白+辅因子辅酶一类可以将化学基团从一个酶转移到另一个酶上的有机小分子,与膜蛋白结合得疏松的小分子有机物,对于特定酶的活性发挥是必要的。辅基酶的辅因子的一种,其中较小的与膜蛋白结合得紧密的非蛋白质小分子有机物部

3、分称辅基单体酶仅有一个活性中心一般是由一条链组成的多肽链构成的酶,能全部参与水解反应。如牛胰岛素。寡聚酶由2个或多个相同或不相同亚基组成的酶。已知所有的变构酶都是寡聚酶。多酶复合体多种酶靠非共价键相互嵌合催化连续反应的体系同工酶能催化相同的化学反应,但在蛋白质分子的结构、理化性质和免疫性能等方面都存在明显差异的一组酶。酶原激活某些酶在细胞内合成或初分泌时没有活性,这些没有活性的酶的前身称为酶原(zymogen),使酶原转变为有活性酶的作用称为酶原激活(zymogenactivation)。Km值米氏常数,等于酶促反应速度达到

4、最大反应速度一半时所对应的底物浓度。是酶的特征常数之一,可近似的反应酶与底物的亲和力大小。Vmax值表示最大酶促反应速度不可逆抑制抑制剂与酶的结合(共价键)是不可逆的。可逆抑制抑制剂与酶的结合是可逆的。竞争性抑制抑制剂和底物竞争与酶结合。非竞争性抑制底物和抑制剂同时与酶结合,但形成的EIS不能进一步转变为产物。反竞争性抑制抑制剂必须在酶与底物结合后才能进一步形成ESI复合物。别构酶具有别构效应的酶称为别构酶。当某些化合物与酶分子中的别构部位可逆地结合后,酶分子的构象发生改变,使酶活性部位对底物的结合与催化作用受到影响,从而调

5、节酶促反应速度及代谢过程,这种效应称为别构效应。别构酶常是代谢途径中催化第一步反应或处于代谢途径分支点上的一类调节酶,大多能被代谢最终产物所抑制,对代谢调控起重要作用。酶活性酶催化特定化学反应的能力。可用在一定条件下其所催化某一化学反应的速度表示。酶活性单位可用来表示酶活力的大小。酶活性单位在一定条件下,一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。(U/g,U/ml)活力回收固定化后固定化酶(或细胞)的总活力占用于固定化的游离酶(细胞)总活力的比例偶联率偶联率=(加入蛋白活力-上清蛋白活力)/加入蛋白活力相对活力相对活力=

6、固定化酶总活力/(加入酶的总活力-上清中未偶联酶活力)半衰期固定化酶(细胞)在连续测定条件下,活力下降为最初活力一半时所经历的时间,称为半衰期.半衰期是衡量固定化酶(细胞)稳定性的指标.酶的固定化利用一定措施将酶束缚或限制于一定区域内,仍能进行其特有的催化反应,并可回收及重复使用的一类技术。固定化酶在一定空间内呈闭锁状态存在的酶,能连续地进行反应,反应后的酶可以回收使用.(不一定是固体)化学修饰凡通过化学基团的引入或除去,而使蛋白质共价结构发生改变,称为蛋白质的化学修饰.选择性化学修饰利用化学试剂对肽链特定的基团的专一性修饰

7、,称为选择性化学修饰.亲和修饰又叫亲和标记,专一性不可逆修饰。修饰剂对被作用基团不仅具有基团的专一性而且具有部位的专一性,它们与底物有相类似的结构,对酶活性部位具有高度的专一性,能对活性部位的氨基酸残基进行共价标记,这类专一性化学修饰称为亲和化学修饰(亲和标记,专一性不可逆修饰)大分子化学修饰可溶性大分子,通过共价键连于酶分子表面形成覆盖层的修饰。如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚丙烯酸(PAA)、聚氨基酸、葡聚糖、环糊精、乙烯/顺丁烯二酰肼共聚物、羟甲基纤维素、多聚唾液酸、肝素等。化学交联利用具有两个反应活

8、性部位的双功能基团使相隔较近的两个氨基酸残基之间或酶与其他分子之间发生交联反应,这种修饰方法叫化学交联蛋白质的稳定性蛋白质抵抗各种因素的影响,保持其生物活力的能力.Tm:蛋白质受热伸展过渡中点时的温度;水活度系统中水的逸度与纯水逸度之比,在理想条件下可用水的蒸气压代替,即在理想条件下水活度

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