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《干旱盐碱胁迫下禾本科植物谷胱甘肽还原酶的活性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、答辩人：关春龙专业：生物工程干旱、盐碱胁迫对苗期羊草GSH-Px活性的影响指导教师：崔喜艳吉林农业大学生命科学学院生物工程专业材料与方法结果分析与讨论结论与致谢目录前言羊草（Leymuschinesis）是多年生根茎型禾本科植物，具有无性繁殖能力强、生产力高、耐干旱、耐贫瘠、耐盐碱等生物生态学特性。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH一PX)即谷胱甘肽:H2O氧化还原酶,分子量7600~9600，是一种水溶性四聚蛋自酶，其四个亚基处在一个平面上，且均有一个硒原子。具有催化活性的硒半胱氨酸位于酶分子178个氨基酸的第35位置上，在酶分子表面凹穴的活性部
2、位，易于接触有机氢过氧化物并使其还原为有机羟化物;GSH一PX也可使H2O2变成H2O，以消除氧化胁迫。还原型谷胱甘肽(GSH)在催化反应中作为氢供体，氧化型谷胱甘肽(GSSG)在谷胱甘肽还原酶(GSSG一R)作用下，还原成GSH。本研究以不同盐碱化程度及干旱程度下的羊草为试验对象，探讨羊草体内谷胱甘肽过氧化物酶对盐碱和干旱环境的活性，进一步揭示羊草抗干旱、盐碱及适应不同生镜的机制，力求为治理退化草地提供理论依据材料与方法实验材料与材料培养1.羊草2.吉林农业大学生命科学学院生物化学515研究室，RXZ型智能人工气候箱材料培养方法与管理1.
3、盆栽砂培2.人工气候箱培养，出苗前每天上午8:00-8:30分浇去离子水50mm透灌，苗出齐后浇Hoagland营养液，照光时间12h(早7:00-晚19:00)。白天温度为28℃±2℃，夜间温度为16℃±2℃12材料与方法实验材料处理方法出苗2周后，每天下午4:00-4:30分，对不同品种分别用盐碱水、PEG6000处理1.2.3天。每天浇适量的水以补充蒸发耗分。不同时间处理的品种都有对照（CK），单纯用Hoagland全营养液透灌实验材料取样方法处理时间到后，选择均匀一致的3盆测定样品，分别剪取叶片，洗净根后液氮速冻，-20℃冰箱保存备
4、用34盐碱水、PEG6000的配置及浓度2346511.试验方法用0.2mol/LpH6.2的磷酸缓冲液(含1mmol/LEDTA-2Na，5%的水溶性PVP)作为谷胱甘肽过氧化物酶（GSH一PX）的提取介质，偏磷酸为酶促反应的蛋白质沉淀剂,二硫代对二硝基苯甲酸(DTNB)与GSH显色反应3min,在412nm测定酶管和非酶管的OD值,以测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性。测定项目与方法3165422.测定时间苗期；试验数据采用3个重复的平均值±标准差，用DNS软件进行数据分析测定项目与方法231654测定项目与方法3.试剂的配制a．迭氮钠-磷酸
5、缓冲液（NaN3-PBS，PH7.0）:2.5mmol/LNaN3，0.2mmol/LEDTA-2Na，0.2mol/LNa2HPO4和0.2mol/LNaH2PO4。b.偏磷酸沉淀夜：含1.67%HPO3，0.05%EDTA-2Na，28%NaCl。c.0.61mol/L三氯乙酸（TCA）。d.0.32mol/LNa2HPO4。e.1.0mmol/LGSH溶液（当日配制）：3.07mgGSH用NaN3-PBS溶解至10ml。f.1.5mmol/LH2O2（当日配制）：取30%H2O215μl，以双蒸水定容至100ml。g.DNTB显色液：
6、DTNB20mg加1%柠檬酸三钠50ml溶解231654测定项目与方法4.蛋白质与GSH标准曲线的制作吸取样品液1.0ml于试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色测定光吸收度并通过标准曲线查得蛋白质含量。样品中的蛋白质含量（mg/g）=C×VT/VS×WF×1000式中：C—查标准曲线值，μg；VT—提取液总体积，ml；VS—样品鲜重，g；WF—测定时加样量，ml取上述标液1.6ml,加0.32mol/LNa2HPO42.0ml和DTNB0.4ml,显色5min,于412nm比色,同双蒸水调零。以OD值为纵
7、坐标,GSH浓度为横坐标,制标准曲线231654测定项目与方法5.酶液的提取分别取经盐碱和干旱处理过的新鲜羊草幼苗叶片及根茎，0.5g加入0.2mol/Ld的磷酸缓冲液（含1mmol/LEDTA-2Na，5%的水溶性PVP,pH6.2)5ml,冰浴中研磨成匀浆,4000r/min离心10min,取上清液于12000r/min离心5min,取上清液供酶活力测定用2315466.酶活力测定测定项目与方法取上述酶液各0.4ml,分别注于酶管和非酶管中,并将非酶管加热使酶失活,分别加入1.0mmol/LGSH0.4ml和经37℃预热的1.5mmol
8、/LH2O20.2ml,立即于37℃下反应3min,再在2支试管中加入1.67%的偏磷酸沉淀液4.0ml,2000r/min离心10min,保留上清液。另取2支试管分别加入上述清
