电泳技术和常用电泳仪(PPT-48)

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1、第六章电泳技术和常用电泳仪第六章电泳技术和常用电泳仪一、概述generalization)电泳（electrophoresis）是指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术（electrophoresistechnique）。可以实现电泳分离技术的仪器称之为电泳仪（electrophoresister）。第六章电泳技术和常用电泳仪目前，电泳技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、无机离子等成份的分离和鉴定，甚至还用于细胞与病毒的研究。临床常用的电泳分析方法主要

2、有醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳和毛细管电泳等。第一节电泳原理一、电泳的基本原理物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。06-01电泳现象和电渗流现象。第一节电泳原理若将带净电荷Q的粒子放入电场，则该粒子所受到的电荷引力为：F引=EQ（6-1）在溶液中,运动粒子与溶液之间存在阻力F阻F阻=6πrηV（

3、6-2）当F引=F阻时EQ=6πrηVV=EQ/6πrη（6-3）由上式可以看出,粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度(η)成反比。第一节电泳原理二、影响电泳的外界因素（一）电场强度（二）溶液的pH值（三）溶液的离子强度（四）电渗作用（五）粒子的迁移率（六）吸附作用第二节常用电泳技术和电泳方法一、电泳技术的分类（一）根据工作原理的不同：可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。（二）根据有无固体支持物可分为：自由电泳和支持物电泳第二节常用电泳技术和电泳方

4、法（三）根据支持载体的位置或形状可分成：水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细管电泳等。（四）根据支持物的特点又可分为：①无阻滞支持物电泳。②高密度的凝胶电泳。（五）根据电源控制的不同，一般可分为以下3类：1.恒压电泳;2.恒流电泳;3.恒功率电泳。第二节常用电泳技术和电泳方法（六）根据自动化程度的不同，可分为半自动和全自动型。（七）根据其功能的不同，可分为制备型、分析型、转移型、浓缩型等。（八）根据用法的类型可分为：双向电泳、交叉电泳、连续纸电泳、电泳－层析相结合技术等。（九）根据不同的使用目的可分为：核酸电

5、泳、血清蛋白电泳、制备电泳、DNA测序电泳等。第二节常用电泳技术和电泳方法二、电泳方法简介（一）纸电泳指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳。06-02平卧式电泳槽装置示意图将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压（100V～1000V）进行电泳。第二节常用电泳技术和电泳方法（二）醋酸纤维素薄膜电泳电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病

6、理情况下微量异常蛋白的检测。06-03血清蛋白的电泳图谱第二节常用电泳技术和电泳方法（三）凝胶电泳由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以凝胶作为介质。电泳中常用的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。它具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小(1～100μg）、分辨率高等优点。06-04凝胶电泳图第二节常用电泳技术和电泳方法（四）等电聚焦电泳1．等电聚焦电泳过程一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物

7、加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH值位置上，最后，样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。06-05净电荷与PH的关系曲线第二节常用电泳技术和电泳方法2．等电聚焦电泳的特点①使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度；②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面；③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择；⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。第二节常用电泳技术和

8、电泳方法（五）等速电泳采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分，