山羊同期发情、超数排卵及胚胎移植研究

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1、西南师范大学硕士学位论文山羊同期发情、超数排卵及胚胎移植研究姓名：陈兵申请学位级别：硕士专业：动物学指导教师：魏泓2003.6.1山羊同期发情、超数排卵及胚胎移植研究学科专业：动物学内容摘要研究方向：动物胚胎工程指导教师：魏泓教授研究生：陈兵(2000263)目的：利用外源激素控制卵泡波和黄体原理，优化山羊同期发情技术、超数排卵技术和胚胎移植技术流程，评价各种处理方法对山羊生殖调控的结果。，方法：试验一(改进同期发情研究)：选择20只健康经产试验羊，两次o．05mgPG处理涧隔11d)，使发’隋阶段同期化．然后用诺孕酮阴道海绵栓处理，放栓同时肌注10mg黄体酮和2mg苯甲酸

2、雌二醇。试验分两组：短期处理组(5d，n=10)和长期组(13d，n=10)，撤栓时注射0．05mgPG。处理末引进公羊试情，撤栓时计为0h，观察记录发情情况，发情结束后剖检卵巢卵泡与黄体发育情况。试验二(改进超排方法研究)：16只健康经产母羊随机分成4组：A组(n：4)，诺孕酮栓处理13d(撤栓时注射O．05mgPG)，第11d开始超排，325IUFSH溶于生理盐水按递减法，分8次肌注．次间间隔12h。；B组(n=4)，诺孕酮栓处理13d，第l1d开始超排，325IUFSH溶解于30％PVP、一次肌注；C组(n=4)，诺孕酮栓处理7d(撤栓时注射0．05mgPG)，第5d

3、开始超排，325IUFSH溶于生理盐水按递减法，分8次肌注，次间间隔12h；D组(n=4)．诺孕酮栓处理7d，第5d开始超排，325IUFSH溶解于30％PVP～次肌注。于撤栓(或注射PG)后引入公羊早中晚各进行一次发情鉴定，发情开始后立即进行配种，并肌注LHRH．A315ug，6～8小时后再配一次，记录终止发情时间和配种时间。在配种后第5,--6d手术法冲胚，并计数卵巢黄体和卵泡数、回收胚胎数以及可移植用胚胎数。试验三(胚胎移植程序化研究)：5只健康经产山羊，经诺孕酮短期法结合FSH的超排处理，分别从输卵管(n=2)和子宫角(n=3)手术回收两个时期的胚胎，然后移植给短期

4、法同期发情的受体羊(输卵管移植n=6．子宫角移植n=12)，观察是否返情、妊娠情况。具体程序为：第0d开始放诺孕酮栓及注射孕酮和雌二醇，第5d用325IUFSH溶于30％PVP一次肌注超排．第7d撤栓．在第9～10d不经过发情鉴定而视之为发情期，第10~1ld配种授精，第13～14d输卵管冲胚或第16--17d子宫角供体冲胚或受体移植。结果：同期发情试验结果，处理山羊全部表现发情(发情率100％)，短期组山羊发情时间(36．-．,60h)比长期组山羊发情时间(40--72h)分布更集中。单因素方差检验证明，两种处理从撤栓到开始发情时间间隔有显著差异(56．80±9．58hV

5、S45．60±6．85h，P<0．叭)，发情持续时间之间没有显著差异(33．90+5．67hVS32．70±1．43h，P>0．05)。发情结束后，从腹腔引出卵巢观察卵泡与新生黄体情况，短期组山羊卵巢表面没有大卵泡存在，而有1~2个排卵点或新生黄体；长期组在撤栓后60h以内发’隋的山羊(6／10)有1—2个排卵点和新生黄体，而60h虬外的羊(4／10)卵巢存在大卵泡且部分黄体化、无排卵点。说明激素处理卵巢反应效果短期法优于长期法。超数排卵试验结果，A、B组之间的超排卵巢反应、获胚总数与可移胚数无显著差异(26vs26，5±2．94vs3．5±3．11，3±3．56vs2．7

6、5±3，40．P>O．10)，C、D组的超排卵巢反应、获胚总数与可移胚数无显著差异(47vs47，9．75±O．96vsl0±1．83，7．75±0．50vs9±1．41，P>0．10)：A组与C组的超排反应、胚胎回收数与可移胚数差异极显著(26vs47，5±2．94vs9．75±0．96，3±3．56vs7．75±0．50．P<0．01)，B、D组之间超排反应、胚胎回收数与可移胚数差异极显著(26vs47，3．5±3．1lvsl0±1．83，2．75±3．40vs94-1．41，P<0．01)。试验结果表明FSH一次(溶于30％PVP)和多次注射(溶于生理盐水)能取得同样

7、有效的超排效果与可移胚数：超排前利用诺孕酮栓处理5d(短期法)比处理13d(长期法)更能提高卵巢反应(黄体数与卵泡数)和可移植用胚胎数。第三个实验结果表明能够按预计的时间进程不经过发情鉴定而实现定时(程序化)胚胎移植，11枚早期胚胎输卵管法移植6只受体，3只妊娠(其中1只产双羔，一只妊娠晚期死亡，有3个发育良好的胎儿)。20枚桑椹胚子宫角法移植12只嬖体，结果5只妊娠(其中3只受体产羔，其中一只羊产三胞胎，另两只为双胞胎)。，结论：孕激素短期(5天)处理能够提高同期发情率和超数排卵反应效果；应用FSH溶解于30％的