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《山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒的研发及应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、#168#疾病防治中国畜牧兽医2011年第38卷第2期山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒的研发及应用文正常,潘淑惠,王璇,蔡一鸣,万一元(贵州省畜牧兽医研究所,贵州贵阳550005)摘要:山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒是应用1998年分离研究的丝状支原体山羊亚种贵罗PG3作为包被抗原,以抗原包被浓度62mg/mL,血清稀释度倍数1!100作为最佳工作条件,其阳性血清D492nm值S>1、阴性血清D492nm值N∀0.5,且具有良好的稳定性。经山羊血清样本反复检测试验表明,其有效率达96.11%,经与山羊传
2、染性胸膜肺炎间接血凝PG3、Y98诊断试剂试验检测比对,ELISA试剂盒对丝状支原体山羊亚种PG3具有较强的敏感特异性。在贵州省部分养羊基地县的推广应用过程中,其对872份非免疫山羊血清样本进行了阳性抗体检测,其平均阳性率达28.33%。这充分表明,本试验建立的ELISA诊断试剂盒对山羊传染性胸膜肺炎PG3的阳性抗体检测具有良好的敏感特异性。关键词:ELISA;PG3;检测诊断;特异性中图分类号:S854.4文献标识码:B文章编号:16717236(2011)02016804支原体(Mycop
3、lasma)是软皮体纲(Mollicutes)生产中,山羊传染性胸膜肺炎的感染目前已成为一支原体目(Mycoplasmatales)中的一类原核微生物,种多发性传染病。但对于山羊传染性胸膜肺炎的实它是一类没有细胞壁、介于细菌和病毒之间的最简验室诊断,仅限于在支原体的分离培养、间接血凝试单和极微小的能自行复制的原核微生物。最早发现验(IHA)及补体结合反应(CF)等方面,由于支原体的支原体病是由丝状支原体亚种(Mycoplasmamy难以培养,培养所需时间长达1周,不利于该病的早coidessubsp.mycoides)引
4、起的牛胸膜肺炎,德国于期诊断与防治。为了寻求和完善该病的早期快速、1763年最早报道,1842年传播到美国,19世纪流行特异性诊断方法,提高疫病快速诊断水平,为疫病的于欧洲,最终成为世界流行性疾病(Timothy,早期防治提供科学依据,2007年以来,贵州省畜牧2005)。1998年贵州省畜牧兽医研究所开始对山羊兽医研究所展开了山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊传染性胸膜肺炎展开了调查研究,并完成该病的病断试剂盒的研发及应用性研究。研究结果表明,应原分离与鉴定(贵罗PG3菌株)、灭活疫苗免疫保护用贵州省山羊传染性胸膜肺炎贵罗
5、PG3株制作细试验及综合防治研究。万一元(2001)的相关流行病胞抗原,建立的间接ELISA方法对山羊传染性胸膜学调查,贵州省山羊传染性胸膜肺炎的阳性感染率肺炎进行血清学诊断及流行病学调查,具有良好的达41.7%,其病原主要是丝状支原体山羊亚种PG3,敏感特异性。快速检测诊断试剂盒的推广及广泛应阳性率为38.3%,其次有绵羊肺炎支原体Y98,阳性用对山羊产业的稳定、快速健康发展具有较好的经率15.8%,并发现PG3和Y98会交叉感染,交叉感染济和社会意义。率达13.8%,说明丝状支原体山羊亚种PG3引起的1试验材料山羊传
6、染性胸膜肺炎严重影响和制约了贵州山羊业1.1制备高免血清及抗原的菌株山羊传染性胸的发展。近年来,随着贵州省草地畜牧业的快速发膜肺炎的丝状支原体山羊亚种PG3地方株贵罗展(2008年已发展33个草地畜牧业示范县),贵州PG3。山羊的养殖量快速增加,其疫病的发生更为频繁,在1.2支原体培养基用营养肉汤粉(杭州某微生物试剂有限公司生产)加10%~20%的马血清(郑州收稿日期:20100804某生物有限公司生产)、酵母浸出汁(上海酵母厂生作者简介:文正常(1964-),男,贵州人,本科,副研究员,研究方产)、青霉素(
7、哈药集团制药总厂生产)10mg/mL、向:动物疫病防治。醋酸铊及国产琼脂自行配制。通信作者:蔡一鸣(1959-),男,高级兽医师,本科。1.3供试阳性血清及抗PG3IgG为贵州省畜牧基金项目:贵州省重大专项计划项目畜禽疫病快速诊断试剂盒的研究与开发(黔科合重大专项字[2006]6002号)兽医研究所动物疫病研究室制备。子项。1.4阴性血清阴性山羊血清购自广州某生物科中国畜牧兽医2011年第38卷第2期疾病防治#169#技有限公司。相同,同时用PBS作空白对照。1.5试剂犊牛血清购自郑州某生物工程有限公2.
8、3.4选定浓度对采集的羊血清进行检测10L司;辣根过氧化物酶标兔抗羊IgG(RbantiGoat血清溶于390LPBS即可。IgG/HRP)购自北京某生物技术有限公司;邻苯二2.3.5敏感性反复检测试验将同一批血清,在2胺(OPD)购自BBI公司;吐温20购自Solarbio公块ELIS
