小分子肽电泳

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1、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽[日期：2007-02-13]来源：[字体：大中小]SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽第四军医大学学报2000年第21卷第6期石继红赵永同王俊楼韩苇颜真张英起摘要：目的研究SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示小分子多肽的方法.方法观察不同方法处理的样品，上样量对电泳结果的影响及对分子量标准（Mr2512～16949）进行直线回归分析.结果样品的不同处理条件未见有差异；在该实验系统条件下上样样品为每孔5～10μg较佳；分子量标准直线回归系数r=-0.

2、962.结论样品处理方便；上样量少；在160g·L-1T，60g·kg-1C较低的丙烯酰胺含6mol·L-1脲的分离胶中能够显示Mr为2512的多肽，是一种显示小分子多肽的较好方法.关键词：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；肽；蛋白质0引言20世纪60年代Shapiro建立了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法之后，Weber，Glossmann和Douglas等人进行了多次改进，已显示出了在分离、鉴定和纯化蛋［1］白质方面的优越性，但对于Mr小于10000的蛋白质来说是无能为力的.20世纪80年代

3、［2］初Schägger等应用脲分离蛋白质复合体亚单位的11种蛋白质，但分离效果不甚理想且重复性较差.之后他们又进行了系统地研究和摸索，能够分离较大Mr范围内的蛋白质.随着生物技术的飞速发展和基因工程药物的大量涌现，具有高生物活性的小分子多肽的分离、纯化和鉴定已显得尤为突出.我们在进行基因工程药物的开发研制中，对SDS-PAGE方法进行了多次改进，在较低的丙烯酰胺浓度下取得了理想的结果.此法所需仪器简单，操作方便，重现性好，时间短，只需微克量的多肽便可显带且能迅速估计出其Mr，值得进一步推广和利用.1材料和

4、方法1．1试剂和仪器SDS、脲、甘油、过硫酸铵均为分析纯，西安化学试剂厂出品；丙烯酰胺（分析纯）为汕头市光华化学厂产品；N，N′-甲叉双丙烯酰胺（分析纯）为浙江黄岩人民化工厂生产；tris（分析纯）为成都试剂厂出品；TEMED为BIO-RAD产品；Tricine(UltrapureGrade)为SolonInd产品.BIO-RAD小型垂直式电泳附件模具；FD-201稳压稳流电泳仪（上海医用分析仪器厂）.1．2肽分子质量标准肽分子质量标准的Mr范围2512～16949为PharmacialKB公司产品.胸腺肽

5、α1是美国加州圣马刁市赛生药品公司产品（商品名“ZADAXIN”），是一乙酰化的多肽，Mr为3108，pI3.8.经SephadexG-25柱去除所含的甘露醇，然后冷冻干燥，用样品缓冲液配成所需样品.1．3方法1．3．1电泳贮存液的配制阳极缓冲液中Tris为0.2mol·L-1用HCl调pH值至8.9.阴极缓冲液为0.1mol·L-1的Tris，0.1mol·L-1的Tricine和0.01g·L-1的SDS溶液，其pH值约为8.25.胶缓冲液为3.0mol·L-1的Tris和0.03g·L-1的SDS，用

6、HCl调pH值至8.4.称取48g丙烯酰胺和1.5gN，N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100mL纯水中，溶解混匀后经4号滤纸过滤即得到495g·L-1T，30g·kg-1C的贮存液；称取46.5g丙烯酰胺和3.0gN，N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100mL纯水中，同样得到495g·L-1T，60g·kg-1C的贮存液（T代表丙烯酰胺的总浓度，C代表交联度）.［3］1．3.2胶的制备与一般SDS-PAGE电泳相似，按Tab1给出的数据分别配制分离胶、间隙胶和浓缩胶，依次灌胶.表1分离胶、间隙胶和浓缩胶的组成tab1Co

7、mpositionofseparating,spacerandstackinggelsPersulfateFinalAcrylamideAcrylamideDistilledGelTEMEDofbufferwaterCompositionUrea100volumesolutionAsolutionB(V/μ-1g·kg(V/mL)L)V/mLV/mL(V/mL)(V/μL)(V/mL)Separatinggel-1160g·LT,-160g·kgC-3.33.33.61.0454.510.05-1with6

8、mol·LureaSpacergel0.60-1.0-1.40202.03.02-1100g·LT,-130g·kgCStackinggel0.30-0.93-1.27252.52.53-160g·LT,30-1g·kgCa:495g·L-1T,30g·kg-1C;B:495g·L-1T,60g·kg-1C.T:thetotalpercentageconcentrationofbothmonomers；C:the