马铃薯种质苗-薯-苗离体循环保存技术

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1、栽培管理中国蔬菜CHINAVEGETABLES2015（2）：74-76马铃薯种质“苗—薯—苗”离体循环保存技术1，21，21，21，21，2*齐恩芳　文国宏　贾小霞　李高峰　胡新元12（甘肃省农业科学院马铃薯研究所，甘肃兰州730070；甘肃省马铃薯种质资源创新工程实验室，甘肃兰州730070）低温保存，虽然可延缓植物生长，减少继代次数，马铃薯种质资源“苗—薯—苗”离体循但耗能成本高；而超低温保存方法尚处于实验室研环保存技术，不用更换培养基即可连续保存究阶段，不能用于大规模种质资源的保存。为了提14～24个月，不

2、仅操作简单、成本低，而且高保存效率、降低成本，笔者利用“苗—薯—苗”安全可靠、省时、省工，有利于促进马铃薯育离体循环保存技术保存马铃薯种质资源，即将马铃种进程和新品种推广。薯种质资源在试管中离体保存，从脱毒试管苗到形成试管薯再到重新形成试管苗，其间不用更换培养目前马铃薯资源主要采用田间繁殖保存和组培基可连续保存14～24个月，继代后正常生长。离体保存。田间繁殖要花费大量的人力、物力和财1　选材力，而且由于连年种植和冬贮，导致各种病害不断从田间种植的种质资源中选择具有品种典型侵染和病毒积累，造成种质资源退化、混杂或遗失。性、

3、生长健壮的植株（从出苗到盛花期均可取样），利用一般的组织培养技术保存马铃薯种质资源，试结合产量情况及病毒检测，选择高产、病害少的单管苗每间隔2～3个月就要转接1次，既浪费材料株，在成熟期选取表皮颜色一致、表面光滑无龟裂又浪费人力、物力；采用培养基中加入植物生长抑的薯块作离体保存材料。制剂的方法，试管苗长时期培养于高浓度的植物生2　脱毒复壮长调节剂中，可能引发遗传变异；采取10℃以下2.1　建立外植体　预保存材料的块茎经自然打破齐恩芳，女，硕士，副研究员，主要从事马铃薯组培脱毒及品种资源研休眠或人工打破休眠萌芽后，掰下小芽

4、，放在烧杯究，电话：0931-7758100，E-mail：qefang@126.com中用纱布罩住，并在自来水下冲洗2h（小时），然*通讯作者：胡新元，硕士，副研究员，专业方向：作物栽培生理学，后于超净工作台上严格消毒。消毒用75%酒精浸E-mail：844374905@qq.com泡30s（秒），再用0.1%升汞浸泡7～8min（分）收稿日期：2014-08-28；接受日期：2014-11-11或0.5%次氯酸钠浸泡15min（分），然后用无菌水基金项目：国家自然基金地区基金项目（31360353），院列创新

5、专项（2011GAAS06-7），国家自然基金项目（31060200）冲洗4遍后，接种于MS快繁培养基上。象或整棚甜瓜植株脱水萎蔫或枯萎，几天内全棚甜会遇到除草剂药害，叶片枯黄、新叶和蔓尖生长瓜枯死。主要是由于棚室内长期超量使用化肥，导点变黑死亡。可用碧护（康凯）20000倍液或云致土壤盐分浓度过高，影响甜瓜根系吸收。大-120（芸苔素内酯）4000倍液喷叶片。预防办法：多施用完全腐熟的有机肥，增施生8.3　冷害　甜瓜遇长时间低温会出现冷害，植株物有机肥，重症地块灌水洗盐，泡田淋失盐分，及叶片变黄，下部叶片萎蔫，严

6、重受害的植株萎蔫时补充钙、镁、硼等微量元素和EM菌肥。死亡。可叶面喷施碧护（康凯）20000倍液或尿素8.2　除草剂药害　甜瓜定植后，由于放风等原因，1000倍液加蔗糖水500倍液，有利于幼苗恢复生长。—《中国蔬菜》学术论文下载74—www.cnveg.org中国蔬菜CHINAVEGETABLES栽培管理2.2　热处理　室温光照条件下培养至外植体分化出苗后，置于人工气候箱中，光照时间14h（小时），温度37℃4h（小时）、31℃4h（小时），交替处理6周。37℃高温钝化病毒，抑制病毒的繁殖，3

7、1℃可提高分化苗的活力。2.3　茎尖脱毒　无菌条件下，剪取分化苗顶端置于40×解剖镜下，用解剖针剥去幼叶，露出带有叶原基的圆滑生长点，切取带1～2个叶原基、大小为0.2～0.3mm的茎尖接种于茎尖培养基上。茎图1　试管苗的保存培养尖越大，越易成活，但不易除掉病毒；茎尖小，成左面3株为对照，右面3株保存4周。苗较难，但脱毒率高。茎尖培养基中加入病毒抑制剂（如利巴韦林等），可提高脱毒率。茎尖培养条件为温度（23±2）℃，湿度75%，光照时间16h（小时），初期光照强度1000lx，4周后2000lx，出苗后增至

8、4000lx。培养30～40d（天）可分化小芽，然后转入快繁培养基生根，发育成3～4片叶的小植株后，单节切段快繁，繁3～4瓶，取其中1瓶用于病毒检测，病毒检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附鉴定法（DAS-图2　试管薯的形成和培养ELISA）。经检测无病毒的试管苗方可用于离体保存。保存1a（年）结薯情