规模化猪场非典型猪瘟的诊断和防制

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1、华东区第十七次中兽医科研协作与学术研讨会论文汇编规模化猪场非典型猪瘟的诊断和防制陈钟鸣1张定东1方光遗1张志威1张t勇2(i．套睫井拄学盹葫粕科学与往术拳院2．汀南井柱学虎)■要：应用反转录一聚台酶链式反应(RT--PCR)和兔体交叉试验，对采自山东、安徽、苏北等不同地区的疑似猪瘟病料进行检测，显示出RT--PCR诊断技术快速、便捷、准确的特点，提示一些猪场非典型猪瘟感染率比较高，并就此提出加强免疫监测，加大猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫剂量，果断淘汰感染母猪等综合性防制措施。关键词：猪瘟；反转录一聚合酶链式反应；诊断；猪瘟防制Ⅸa

2、舯∞isandpreventionofHogCholeraOBthepigswithouttypicalsignsiⅡintensivepigfarmsZhongnfingCh％1，DingdongZhan91，CmangyuanFang‘，Zhich∞gZha091．办iyongZhan92(1．DepmmmntofAmmalScienceandTechnology,JinlingInstituteofTeclmology2．HenanInstituteofScienceandTechnology)Abstract：The

3、revfrseⅡ∞sc邱tascpolymcraseChUBreaction(RT-PCR)andtherabbitcrossreactiontestwcfeappHedtodetectsuspectedHogCholera饵c)ClinicalsamphfromShandongprovince，AnhuiprovinceandtherlorthofJiangshuprovince．TheresultsindicatedthattIIeRT—PCRtechnologypOSSCSSe-sSOIIIeadvantagesofr

4、apidness．simplicityandaccuracy；anditalsoshowedthatthepositiverateofHogCholeraOllthepigswithouttypicalsignswasconsiderablyhighinsoroeintensivepigfarms．Inaddition，theintegratedwaysandmeansincludingsnngtheningimmunityinspection，addingthedosageoflapinisedvirusvaccinean

5、deliminatinginfectedSOWSwereproposed．K卵words：HogCholera；RT-PCR；Diagnosis；Prcve∞fioa猪瘟(Hogcholera，HC)是严重危害养猪业的主要传染病之一，目前在世界上除北美和大洋洲以外的多数地区广泛流行。我国自推广应用猪瘟兔化弱毒疫苗(HCL)以来，典型的猪瘟得到了有效的控制，我国已多年未出现大面积的猪瘟暴发。但猪瘟在我国的许多地区仍然时有发生．它的流行和发病特点也发生了很大变化，缺乏规律性的临床症状和病理变化，其中非典型猪瘟、温和型猪瘟，占据了

6、猪瘟流行病学的主流趋势，主要表现为持续性感染，胎盘垂直感染、妊娠母猪带毒、流产、死胎，新生仔猪免疫耐受等“J，给猪瘟的诊断带来了新的问题，使不少养猪企业蒙受了较大的经济损失。我们通过对苏北、安徽、山东等地的一些规模化猪场的调查，发现猪瘟在猪病中的比例仍比较高“，我们针对非典型猪瘟诊断比较困难的问题，建立了RT--PCR技术诊断猪瘟的方法，结合猪瘟的其他诊断方法，对几个猪场的发病情况进行了诊断，收到了比较好的效果，现报告如下。1材料与方法I．1试剂dNI'PS(dATP，dCTP，dGTP，dTrP)M—MI，VRTase，T

7、aq酶为Promega公司产品。DNAMarl(er为DL2000，(TakakaBIOTECH，大连宝生物公司)PCR仪：PTC--225，美国MJ公司。1．2寡聚核苷酸引物117华东区第十七次中兽医科研协作与学术研讨会论文汇编引物根据参考文献p1和已知猪瘟序列设计。P1：5’埘CCTGGTTGGTAACCTCGG--3’，P2：5’--TGATGCTGTCACACAGGTGAA--3’，参考毒株及试剂由江苏省农科院兽医研究所何孔旺研究员提供。1．3待检病料由苏北、山东省、安徽省几个规模化猪场采集的疑似猪瘟病料，在冰浴条件

8、下，经灭菌研钵充分研磨后用Hank’s液按1；2的比例稀释成乳荆，置．20℃冰箱保存。1．4猪瘟病毒RNA的提取取病料乳荆50mg，加5000aTRklReagent，室温孵育5rain4℃，12000rpm离心20min，取上层水相，加0．5ml异丙醇，混匀，室温放置10min，．20"