核移植技术与动物克隆

《核移植技术与动物克隆》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第八章核移植技术与动物克隆Nucleartransplantation＆AnimalCloningTechnologyNucleartransplantation＆AnimalCloningTechnology◆What技术原理◆How技术方法◆Why技术应用CellEngineering细胞拆合与重组概述1、细胞拆合技术的发展概况ò1952年Briggs和King首创了核移植的方法ò1967年Careter发现细胞松驰素B能诱发体外培养的小鼠成纤维细胞的排核作用ò1972年Prescott等首先应用离心结合CB分离哺乳类细胞的胞质体获得成功ò细胞核、质分离技术与细胞融合技术汇合起来，

2、建立了细胞重组技术CellEngineeringò胞质体（cytoplast）：除去细胞核后由膜包裹的无核细胞，由细胞松弛素B处理后，经离心得到。ò核体（karyoplast）：由胞质体分离出来的核，带有少量胞质并围有质膜的结构。ò胞质杂种细胞：将胞质体和另一完整细胞融合得到的细胞。ò杂种细胞：核体与完整细胞融合。ò重组细胞：核体与另一种细胞的胞质体融合。CellEngineeringò1、2、3亲本细胞ò4、6核体ò5、7胞质体ò8、9杂种细胞ò10重组细胞ò11胞质杂种细胞òⅠPEG介导òⅡ筛选CellEngineering2、细胞拆合与重组的概念（1）细胞拆合:ò把完整细胞的细胞

3、质和细胞核用特殊的方法分离开来，或把细胞核从细胞质中吸取出来，或用紫外线等把细胞中的核杀死，然后再把同种或异种的细胞核和细胞质重新组织起来，培育新的细胞或新的生物个体CellEngineering（2）细胞重组（cellreconstruction)ò将细胞融合技术与细胞核质分离技术结合，即在融合介子的诱导下，使胞质体与完整细胞合并，或胞质体与核体重新组成，构成细胞的过程CellEngineering3、细胞拆合的方法（1）物理拆合法ò用紫外线或激光将核破坏，再用微玻璃针或微吸管将其他细胞核注入（最早使用）ò将细胞融合技术与显微外科手术结合，作微吸管将细胞核连同周围少量细胞质吸出，再注

4、入已去核的细胞中CellEngineering显微操作法进行细胞核移植CellEngineering（2）化学拆合法☆细胞松驰素（Cytochalasin）B结合高速离心☆CB阻断细胞质分裂，不干扰核分裂；引起细胞表面形状的改变和排出细胞核。机理：CB是真菌的一种代谢产物，可以切断微丝，并结合在微丝末端阻抑肌动蛋白聚合，但对解聚没有明显影响，因而可以破坏微丝的三维网络！CellEngineering第五章核移植技术与动物克隆一、核移植核移植供体核移植受体核移植方法激活、培养与胚胎移植二、动物克隆基本方法克隆羊“多莉”的培育三、现状与前景CellEngineering核移植技术与动物克隆

5、原理和方法将受体卵细胞去核（？）移植后的细胞激活后可以象受精卵一样发育形成动物个体，并具有与核供体细胞相同的基因向去核卵细胞植入（？）供体细胞（？）CellEngineering●核移植？第二代试管婴儿◆卵母细胞胞浆内单精子注射(Intracytoplasmicsperminjection，ICSI)CellEngineering●核移植？第四代试管婴儿◆借助别人卵浆增强自己卵子活力◆特征：卵浆置换◆主要针对那些卵子质量不高、活力差的高龄女性CellEngineering一、核移植技术1、核移植供体◆胚胎、胎儿细胞——胚胎细胞核移植胚胎卵裂球、干细胞和胎儿成纤维细胞等◆体细胞——体细胞

6、核移植◆完整的二倍体，含供体动物的完整基因组◆在受体细胞质环境中，完成分化过程的倒转（重编程reprogram），能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程CellEngineering如何获取供体细胞核？◆显微操作◆细胞松弛素结合高速离心核体胞质体CellEngineering2、核移植受体细胞•受体细胞的种类：卵母细胞、受精卵、2-细胞胚胎。•其中卵母细胞最为普遍。作为核移植受体的处于第二次减数分裂中期（MII）的卵母细胞可以经超排卵或体外成熟培养的卵巢细胞得到◆去核卵母细胞（收集方法？）◆细胞体积较大◆决定细胞向某一方向分化的初始信息储存于卵细胞中CellEngineeri

7、ng如何给受体细胞去核？◆显微操作◆细胞松弛素结合高速离心◆紫外照射CellEngineering3、核移植的方法◆去核卵细胞胞浆内显微注射◆核体透明带下注射，再刺激核体与胞质体融合CellEngineering4、移植后重组细胞的激活、培养、胚胎移植◆激活（使卵母细胞从MII期解放，转到“受精”状态）◆重组胚的体内或体外培养◆胚胎移植CellEngineeringCellEngineering重构卵的激活ò正常情况下,受精过程中，精子进入卵子