流式细胞仪检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核方法的改进

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1、毒理学杂志2011年1O月第25卷第5期JToxicolOctober2011Vo1．25No．5[4]詹纯列，肖育华，李新春，等．普通级、SPF级SD、WistarToxicology，2006，44(2)：147—160．大鼠血液生化值的测定与比较[J]．中国比较医学杂志，[7]HammondB，DudekR，LemenJ，eta1．Resultsof13一2004，14(2)：94—96．weeksafetyassurancestudywithratsfedgrainfrom[5]张敏，纪晓光，王京燕．清洁级Wistar大鼠血常规及生

2、化glyphosatetolerantcorn[J]．FoodandChemical指标正常值观察[J]．中国消毒学杂志，2006，23(2)：Toxicology，2004，42(6)：1003-1014．l19．123．[8]卓勤，陈小萍，朴建华，等．转可豆胰蛋白酶抑制剂稻谷9o[6]HammondB，LemenJ，DudekR，eta1．Resultsof90一day天喂养实验研究[J]．卫生研究，2OO4，33(2)：176-179．safetyassurancestudywithratsfedgrainfromcornrootwo

3、rm-protectedcorn[J]．FoodandChemical(收稿日期：2011—01—12)中图分类号：R994．6文献标识码：B文章编号：1002—3127(2011)05—0394—04·方法研究·流式细胞仪检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核方法的改进冯晓青，尉红，万建美，李冰燕，张增利(苏州大学医学部公共卫生学院，江苏省放射医学与防护重点实验室，江苏苏州215123)关键词：微核试验；流式细胞仪；小鼠微核试验是以动植物为材料，利用细胞生物学方速的小鼠骨髓嗜多染红细胞流式细胞仪检测方法，以法观察其出现的微核率(micmnucleu

4、sfrequency，MNF)进一步推动自动化微核实验的发展。来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。微核试验创建于20世纪80年代，由于微核实验1材料与方法具有快速、简单、灵敏、客观的特点，目前许多国家和国1．1动物健康ICR雄性小鼠20～25g，由苏州大学际组织已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品动物中心提供。许可证号：SCXK(苏)2010-2010。所等毒理安全性评价的必做试验。有动物在同等条件下饲养，自由饮水和摄食。传统的微核实验显微镜检测费时、费力，结果易受1．2试剂与仪器环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有主观因素影响

5、，难以满足大量毒理学检验任务的要限公司)，1，4哌嗪二乙磺酸(PIPES)，TritonX．100(均求⋯。采用流式细胞仪的微核试验自动化检测有很为北京Solarbio公司)，碘化丙啶(PI，美国Sigma公多优点：(1)检测速度至少比人工读片快40—100倍；司)，其余试剂均为国产市售分析纯。PIPES溶液：(2)减少了人为的主观因素；(3)使用具有分选功能的27．75mgCaC12+584．4mgNaC1+346．3mgPIPES+流式细胞仪，对判定为含微核的细胞，还可以分类检出40．67mgMgC12，加双蒸水至100ml。PIPES

6、—PI溶液：并收集在玻片上或试管里，在显微镜下检查验证，以证10mlPIPES溶液+0．5mgPI+0．01mlTriton100X。实其真实性并计算其可置信度。由于已建立的微DL-5低速大容量离心机(中国上海安亭科学仪器核流式细胞仪的自动化检测方法中多是双染色、双激厂)，CytomicsFC500流式细胞仪(美国Bechman光流式仪检测，技术要求高，仪器复杂；又或者样品前Coulter公司)，CHK型显微镜(日本Olympus公司)。处理复杂，操作繁琐，影响实验的效率。鉴于以上原1．3方法因，本实验采用环磷酰胺诱导小鼠微核形成，在现有单

7、1．3．1动物分组及药物处理：取小鼠20只，随机分为激光流式细胞仪检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验4组，每组5只。给予小鼠单次腹腔注射环磷酰胺，其方法基础上进行改进和创新，目的是建立更简便和快剂量分别为0、10、20和40mg／kg。1．3．2流式细胞仪检测方法：给药后24h断颈处死基金项目：国家自然科学基金项目(81072286，30972467)作者简介：冯晓青，硕士研究生，研究方向：遗传毒理学。小鼠，分离两侧股骨后PBS冲出股骨骨髓细胞，使用4通讯作者：张增利，副教授，硕士生导师，研究方向：分子毒理学。号针头制成单细胞悬液，离心5ra

8、in，PBS重悬后调整毒理学杂志2011年10月第25卷第5期JToxicolOctober2011Vo1．25No．5细胞浓度为2×10，离心弃上清后每个样品小心加入(nucl