重组神经生长因子NGF-DOPA的制备及其与导管材料粘附性能研究

《重组神经生长因子NGF-DOPA的制备及其与导管材料粘附性能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R318单位代码：10183研究生学号：2015772047密级：公开重组神经生长因子NGF-DOPA的制备及其与导管材料粘附性能研究PreparationofRecombinantNerveGrowthFactorNGF-DOPAandtheResearchofitsAdhesionPropertytoConduitMaterials作者姓名：陈利专业：生物医学工程研究方向：生物医用材料指导教师：陈月副教授培养单位：药学院2018年5月重组神经生长因子NGF-DOPA的制备及其与导管材料粘附性能研究PreparationofRecombinantNerveGrowthF

2、actorNGF-DOPAandtheResearchofitsAdhesionPropertytoConduitMaterials作者姓名：陈利专业名称：生物医学工程指导教师：陈月副教授学位类别：医学硕士答辩日期：2018年5月22日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士(或硕士)学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作

3、所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章

4、程规定享受相关权益。论文级别：硕士□博士学科专业：生物医学工程论文题目：重组神经生长因子NGF-DOPA的制备及其与导管材料粘附性能研究作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林省长春市高新区万龙丽水湾（130000）作者联系电话：18843107020中文摘要外周神经损伤严重影响了肢体的功能以及病人的生活质量，目前仍然是临床的难题之一，而神经组织工程的发展为其提供了新方向。神经导管支架是神经组织工程中常用的材料，其中可生物降解的合成高分子材料，因其优良的性质，近年来成为制备神经导管支架的优良选择。但高分子材料导管一般仅能接合神经断端，并不具有促进神经再生与修复的

5、生物特性。为了改善高分子导管材料的生物性质，近年来越来越多的研究者在神经组织工程中引入可促进神经细胞生长、髓鞘再生和轴突形成的神经生长因子。神经生长因子NGF是由神经细胞分泌的具有多种功能的营养因子，对损伤的神经具有营养、促进再生及修复的作用，因而被广泛应用于中枢与外周神经修复。而神经生长因子的半衰期短、容易失活，且易被体液稀释而降低其作用效果，因而如何将神经生长因子更有效地固定在材料表面以保持和提高其作用效果是近年来研究的热点。自然界中海洋贻贝类具有强烈的粘附性，研究者从中受到启示，发现其粘附成分主要是3,4-L-二羟基苯丙氨酸（3,4-L-dihydroxyphenylala

6、nine,DOPA），因而以这种具有粘附能力的DOPA结构作为媒介，能将神经生长因子NGF更有效地固定于神经修复材料上，对其进行改性。本课题首先通过基因工程技术将酪氨酸重复序列基因（Tyrosine-Lysine-Tyrosine-Lysine-Tyrosine,YKYKY）整合到NGF基因末端，利用大肠杆菌表达系统进行重组蛋白的表达，并利用Ni柱亲和层析法对目的蛋白NGF-YKYKY进行纯化，通过酪氨酸羟化反应将其中的酪氨酸转化成DOPA结构，对所获得的目的蛋白进行理化性质与生物活性的检测。将聚碳酸亚丙酯(Poly(propylenecarbonate),PPC)与聚乳酸-羟基

7、乙酸共聚物(Poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA)两种材料复合，通过溶液置换法，制备了不同原料比的多组神经导管支架，利用多种检测手段筛选出性能最优的一组。最后将NGF-DOPA与PPC-PLGA复合材料结合，对获得的改性神经导管材料进行一系列检测，并利用大鼠雪旺细胞对这种改性神经导管材料的生物活性进行检测。实验结果表明所构建的NGF-YKYKY基因载体可在大肠杆菌中表达，纯化和复性后经特异性鉴定确定所获得的蛋白为目的蛋白，经活性鉴定发现YKYKY和D