TFDG对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用

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1、分类号：S859.7.单位代码：10183研究生学号：2015852008密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）TFDG对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用TheinhibitoryeffectofTFDGontheactivityofclassBβ-lactamase作者姓名：滕梓皓专业：基础兽医学研究方向：兽医药理毒理指导教师：邓旭明教授培养单位：动物医学学院2018年6月TFDG对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用TheinhibitoryeffectofTFDGontheactivityofclassBβ-lactamase作者姓名：滕梓

2、皓专业名称：基础兽医学指导教师：邓旭明教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年06月03日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出

3、重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。论文级别：■硕士□博士学科专业：基础兽医学论文题目：TFD

4、G对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：辽宁省辽阳市白塔区富虹水月翰宫作者联系电话：13069208990中文摘要TFDG对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus,金葡菌）广泛存在于自然环境中，可引起多种危及生命的恶性感染性疾病，如败血症、心内膜炎以及坏死性肺炎等等。金葡菌耐药性常年为相关感染性疾病治疗的最大障碍，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA）的广泛扩散更

5、是为临床治疗带来了巨大的挑战。研究表明，将近90%的MRSA菌株具有多重耐药性，可对包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类以及氟喹诺酮类等抗生素在内的多种常见治疗药物同时耐药。甚至被视为MRSA首选治疗药物的万古霉素也已出现相应的耐药菌株，表明MRSA感染可能会面临着无药可用的局面。β-内酰胺酶是金葡菌对β-内酰胺类药物耐药的主要原因之一，可高效催化β-内酰胺环的水解过程，使药物失去抗菌活性。β-内酰胺酶的编码基因（bla）可被质粒携带扩散至多种致病菌中，形成耐药性的传播。β-内酰胺类抗生素自发现以来，一直是人类最为依赖的抗菌药物，每年使用量

6、占抗生素总使用量的60%左右。然而，已有研究显示，临床中将近95%的金葡菌分离株拥有高效表达β-内酰胺酶的能力，严重影响了β-内酰胺类药物在相关感染性疾病中的应用。目前临床中只有少数几种β-内酰胺酶抑制剂可辅助用于抗感染治疗，且均存在较大的局限性。现有的β-内酰胺酶抑制剂只可靶向A、C和D三类β-内酰胺酶，尚没有任何以B类β-内酰胺酶（Metallo-β-lactamases,MBLs）为靶点的抑制剂应用于临床治疗中，而近年来MBLs的大范围扩散已成为重要的耐药因素。本研究通过头孢硝噻吩水解实验和分级抑菌浓度实验发现茶黄素-3,3´-没食子酸

7、酯（Theaflavin-3,3´-gallate,TFDG）可有效地抑制MBLs的水解活性，从而可显著地增加β-内酰胺类药物对MRSA菌株的抗菌能力。我们选定临床中拥有强致病力的MRSA菌株BAA1717为主要的实验菌株，其所表达分泌的代表性MBLs——β-lactamaseN1，为主要的靶向蛋白。在随后的分子对接和分子动力学模拟实验中，我们对TFDG与β-lactamaseN1的结合方式和结合位点进行计算，I并通过氨基酸残基定点突变技术对模拟结果进行验证，找到了TFDG的靶向氨基酸残基（Gln242和Ser369）。在小鼠金葡菌感染模型中

8、，TFDG与β-内酰胺类抗生素的联合治疗组有效的降低了小鼠的死亡率、减少了小鼠肺脏中金葡菌的定植数量，缓解了肺脏相应的组织病变症状，展现了良好的保护效果。中国是茶的